大鼠脑缺血再灌注后大脑皮质细胞凋亡的体视学观察

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1、摘要为了观察脑缺血再灌注后不同存活时间内大鼠大脑皮质不同区域细胞凋亡的变化情况，本实验选取42只SD大鼠，将其随机分为对照组，缺血15min再灌注6h、12h、24h组，缺血2h再灌注6h、12h、24h组，每组6只。通过结扎左侧颈总动脉，动脉夹夹闭右侧颈总动脉15min和2h后松开动脉夹恢复血流的方法构建脑缺血再灌注模型。采用Hoechst33258荧光染色和Bax免疫组化方法观察海马CAl、CA2、CA3、CA4区、齿状回及顶叶皮质区细胞凋亡情况，用体视学参数一一体积密度(vv)和数密度(Nv)定量地

2、分析这些区域细胞在脑缺血再灌注后不同存活时间内的凋亡情况。结果如下：Hoechst33258荧光染色：凋亡细胞细胞核在紫外光下呈现出明亮鲜艳的蓝色荧光。各缺血再灌注组中上述大脑皮质各部位凋亡细胞Vv和Nv与对照组比较均有极显著性增大(P<0．01)。上述大脑皮质各部位凋亡细胞Vv和Nv变化情况：在3组缺血15min再灌注中，凋亡细胞Vv和Nv在12h显著上升(P<0．05)，海马CAl、CA2区以及顶叶皮质区在24h极显著上升(P

3、P

4、(PO．05)。顶叶皮质区凋亡细胞Vv和Nv均高于海马和齿状回区，并且有极显著性差异(P<0．01)。海马凋亡细胞Vv高于齿状回，而Nv无显著性差异(P>0．05)。脑缺血2h再灌注后，CAl区凋亡细胞Vv和Nv最大，CA2区其次，然后是CA3，最后为CA4。CAl与CA2、CA3及CA4比较均有极显著性差异(P0．05)。项叶皮质区凋亡细胞Vv和Nv高于海马

5、和齿状回，并且有极显著n摘要性差异(Po．05)。Bax免疫组化结果：Bax免疫组化阳性细胞胞浆、胞核均着色，呈棕黄色，且Bax免疫组化阳性细胞多为锥体细胞。各缺血再灌注组中上述大脑皮质各部位Bax免疫组化阳性细胞的Vv和Nv与对照组比较均有极显著性增大(P<0．01)。各缺血再灌注组Bax免疫组化阳性细胞Vv和Nv组间比较结果：在3组缺血15min再灌注中，vV和Nv在12h显著上升(P<0．05)，海马CAl、CA2区以及顶叶皮质区在24

6、h极显著上升(P

7、显著性差异(P<0．05)，与CA3及CA4比较均有极显著性差异(P<0．01)，CA2与CA3及CA4比较有显著性差异(PO．05)。与海马比较，顶叶皮质区Bax免疫组化阳性细胞Vv和Nv更大，且两者之间有极显著性差异(P

8、A3及CA4比较有显著性差异(PO．05)。顶叶皮质区Bax免疫组化阳性细胞Vv和Nv均高于海马区，且两者之间有极显著性差异(P<0．01)。在齿状回未发现Bax表达。各缺血再灌注组中上述大脑皮质各区域Hoechst33258荧光染色显示的凋亡细胞Vv和Nv与Bax免疫组化阳性细胞Vv和Nv比较均有显著性差异(P