鸡减蛋性病毒病四联油乳剂灭活疫苗的研制与应用

鸡减蛋性病毒病四联油乳剂灭活疫苗的研制与应用

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1、大会发言鸡减蛋性病毒病四联油乳剂灭活疫苗的研制与应用’丁伯良,那明华,王英珍,李秀丽,张健,侯庆云,王东,张莉(天津市畜牧兽医研究所,300112)〔摘要〕选用鸡新城疫病毒Lasota株、鸡传染性支气管炎M41株、鸡减蛋综合征病毒EDS=-AV,z,株及禽流感H,亚型6s等四株作为制苗用毒种,采用中空纤维超滤浓缩技术,研制成四联油乳剂灭活疫苗,进行物理性状、安全性、免疫和效力检验及疫苗保存期试验,并在天津及河北等地进行田间应用试验,共免疫蛋鸡18万羽份,免疫期达6个月,免疫保护率达95。〔关扭询〕新城疫,传染性支气管炎,减蛋综合征,禽流感,毒株;四联灭活疫苗近年来,随着我国家禽生产规模的扩大和

2、饲养1.1毒种鸡新城疫病毒(NDV)Lasota株、鸡新城疫量的增加,使家禽疫病日益增多,一些重要疫病如鸡强毒F,,E。株、鸡传染性支气管炎病毒(IBV)M=株、新城疫(ND)、传染性支气管炎(IB)、减蛋综合征鸡减蛋综合征病毒(EDSV)EDS,6-AV,z,株,均由(EDS)和禽流感(AI)等引起鸡呼吸道炎症和蛋鸡中国兽药监察所提供;禽流感病毒(AIV)(H。亚型)减蛋的病毒性疾病造成的损失也越来越大。疫病的Ss株由本课题组分离鉴定和保存。增多和频繁发生,迫使人们在家禽饲养中过多地使1.2血清ND,IB阳性血清和阴性血清购自中国兽用疫苗。药监察所;EDS,AI(H9)阳性血清和阴性血清购自

3、疫苗免疫次数的增多,使疫苗接种已成为养禽中国农科院哈尔滨兽医研究所。业中较为繁重的工作之一。如何降低疫苗接种的工1.3试验动物及鸡/鸭胚1一2月龄非免疫罗曼雏作量以及对家禽的应激反应,受到人们越来越多的鸡、9-11日龄非免疫鸡胚均由天津市大良庄种鸡关注。多联疫苗由于具有一针防多病的效果,成倍地场提供;10-11日龄易感鸭胚,由天津市宝低某鸭减少了疫苗接种人员的工作量,最为引人注目。目场提供;9-11日龄SPF鸡胚,购自山东省农科院家前,多联疫苗的研究开发,已成为国内外疫苗研究的禽研究所。‘热点之一。一’〕。然而,由于多联疫苗需要较高的抗原1.4各种检验用培养基及试剂各种检验用培养基浓度,单纯改

4、变疫苗乳化工艺中的油水比例以及通均为北京中海生物技术有限公司产品,7#矿物油由过改变病毒增殖条件提高病毒含量很难满足多联疫杭州炼油厂提供;司班一80、吐温-80和硬脂酸铝苗生产的需要,致使一些多联疫苗产品单位体积疫等化学试剂均购自天津天大化工厂。苗中抗原含量不足,存在免疫效果较差,免疫期短等1.5主要仪器设备中空纤维超滤器,天津工业大学问题。如何应用现代技术解决多联高效灭活疫苗生膜分离技术研究所生产;胶体磨,沈阳新光机器厂产产中提高抗原浓度的问题,已成为多联疫苗研究中品;均质机,购自上海华东均质机厂。的关键技术之一〔毛一‘〕。1.6抗原的制备与浓缩本研究根据当前我国禽病的发病特点和疫病防1.6

5、.1抗原的制备NDV,IBV,EDSV和AIV(H9)制的实际需要,针对性地开展鸡减蛋性四联(ND-均按常规方法,接种适龄非免疫鸡胚或易感鸭胚,IB-EDS-AI)油乳剂灭活疫苗(简称四联苗)研究,371C孵育48-120h后,分别收获鸡胚/鸭胚尿囊液,解决生产实际中多联疫苗缺乏和灭活疫苗稳定性较采用微量法测定其对1%鸡红细胞的凝集价(HA差的问题,为天津及周边地区当前流行的家禽疫病价),IB病毒液用1%胰蛋白酶4℃处理过夜后再测的防制奠定基础。定。同时进行无菌检验,合格者置4℃保存备用。1.6.2抗原的浓缩将收集的NDV,IBV和AIV1材料与方法(H9)尿囊液分别用无菌纱布过滤,应用中空纤

6、维超.墓金项目:天津市重大科技攻关项目(003121241)作者简介:丁伯良(1948-),男,研究员,博士,从事畜禽疫病诊断与防治研究一113—中国畜牧兽医学会禽病学分会第十四次学术研讨会论文集滤器浓缩2-4倍,并采集样品测定浓缩液中NDV,下注射1.5m1/只,观察2周,注射疫苗部位应无不IBV和AIV(H9)的HA效价。浓缩后病毒液中良反应,且试验鸡全部健活为合格。NDV,IBV和AIV(H9)对1%鸡红细胞的HA价)1.8.6效力检验将1月龄非免疫雏鸡40只分成4lOlog2者为合格。组,每组10只,每只鸡皮下或肌肉注射疫苗0.5m1,1.7病毒液的灭活与检验同时设空白对照鸡20只。2

7、8日后,第1,2组鸡分别1.7.1病毒液的灭活将NDV,IBV和AIV(H9)浓用NDVF,,E。强毒和IBVM=强毒进行攻击,观察缩液和EDSV病毒液分别加人终浓度为0.2%的福14日,记录发病、死亡与保护的鸡数,同时每组设攻尔马林溶液,37℃灭活24h,分别采集样品进行检毒对照鸡5只。第3,4组于免疫后28d,翅静脉采验。血,分离血清,测定EDS,AIV(H,亚型)HI抗体,1.7.2无菌检验

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