鸭细小病毒病灭活疫苗的研制

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1、全日制硕士专业学位（毕业）论文鸭细小病毒病灭活疫苗的研制学位申请人：李晓轩指导教师：袁万哲教授学位名称：兽医硕士研究领域：不区分研究领域授予单位：河北农业大学答辩日期：二〇一八年六月三日分类号：S855.3单位代码：10086密级：公开学号：20169200788鸭细小病毒病灭活疫苗的研制Developmentoninactivatedvaccineagainstduckparvovirusdisease学位申请人：李晓轩指导教师：袁万哲教授学位名称：兽医硕士研究领域：不区分研究领域授予单位：河北农业大学答辩日期：二〇一八年六月三日摘要2014年11月以来，我国部分地区所饲

2、养的肉鸭发生了以雏鸭发育迟缓、上下喙萎缩、舌头外伸为特征的疾病。根据其发病临床特征命名为鸭短喙-侏儒综合征（duckshortbeakanddwarfismsyndrome，SBDS）。本实验室通过病原分离以及动物回归实验，确定了引起SBDS的病原为鸭细小病毒（DuckParvovirus）。目前，防控该病尚无商业化的疫苗，给我国养鸭业造成了较大经济损失。鉴于此，作者选取鸭细小病毒流行株制备了鸭细小病毒病灭活疫苗，围绕新制品的研制对其实验室试验进行了一些有益的探索。将15只1日龄的樱桃谷雏鸭随机分成三组：第1组（口服组），每只口服1mL病毒尿囊液：第2组（肌肉注射组），每只

3、肌肉注射病毒尿囊液1mL(EID-4.550为10/0.2mL），第3组(对照组），每只雏鸭口服1mL生理盐水。在感染鸭细小病毒后7、14、21d分别对三组动物称重、测量喙长，口服组雏鸭体重极显著低于对照组，肌注组低于对照组，因此确定最佳感染途径为口服途径。为探明该病毒的生物学特性，将SD株鸭细小病毒用鸭胚传至40代，分别用10、20、30、40代病毒对动物进行攻毒实验。结果表明，F10代鸭细小病毒组雏鸭体重和喙长和对照组差异极显著，感染F20〜F30代病毒组雏鸭体重和喙长与对照组对比差异显著，感染病毒F40代病毒组雏鸭和对照组差异不显著，感染后，21d均可以检测到排毒。综

4、上所述，该病毒传至40代，病毒对动物的致病力降低。将保存的鸭细小病毒分离株经鸭胚传代五次，收获病毒尿囊液。9000r/min离心10min。取上清，加双抗。将提前处理好的尿囊液和吐温-80按比例制作水相，按照油相和水相2:1比例将二者混匀，制备油乳剂灭活疫苗。并对种毒纯净性和疫苗的外观、粘度、稳定型、安全性和保存期的质量检验。为评价制备的灭活疫苗的免疫效力，将50只1日龄的雏鸭随机分为5组，每组10只，1〜4组为免疫组，免疫剂量分别为100μL、250μL、500μL、1000μL，第5组为对照组。免疫后7d进行免疫保护实验，观察实验鸭的临床症状和排毒情况。结果表明疫苗外观

5、为乳白色、油包水型、无外源病毒污染、粘度符合标准、稳定性良好、对动物无不良影响、4℃可保存1年以上；对疫苗安全性检验用20只1日龄雏鸭，随机分为两组，每组10只。一组注射成品疫苗为疫苗组，二组注射白油佐剂为对照组。疫苗组和对照组对比后精神状态正常、注射部位没有发生炎症，证明安全性检验合格；免疫保护实验中，对照组在攻毒后3d泄殖腔肛拭子检测到部分阳性，100μl〜1000μL四组免疫组检测结果全部阴性。攻毒后5d对照组全部阳性，而1〜4组免疫组检测结果全部阴性。直到攻毒21d后，对照组检测仍然全部呈阳性，四组免疫组检测全部阴性。上述结果表明制备的鸭细小病毒灭活疫苗安全、稳定、

6、易于储存运输，雏鸭免疫后可以获得坚强保护。本研究通过不同代次病毒接种动物，探明该病毒的生物学特性。为了有效预防本病的蔓延，用该毒株制备鸭细小病毒灭活疫苗，疫苗安全有效，能在雏鸭易感日龄提供保护，为鸭细小病毒疫苗的研制提供了依据。关键词:鸭细小病毒；鸭短喙-侏儒综合征；灭活疫苗；最小免疫剂量DevelopmentoninactivatedvaccineagainstduckparvovirusdiseaseAuthor：LixiaoxuanAdvisor:Pro.YuanwanzheMajor:VeterinaryMedicineAbstractSinceNovember20

7、14,ducksrearedinpartsofChinahavedevelopeddiseasescharacterizedbystuntedgrowthofducklings,atrophyoftheupperandlowerjaw,andtongueextension.Accordingtoitsclinicalcharacteristics,itwasnamedduckshortbeakanddwarfsyndrome(SBDS).Thelaboratorydeterminedthatthepathogenr