Ⅰ群禽腺病毒分离鉴定与通用PCR检测及FAdV-4油乳剂灭活疫苗的研制

《Ⅰ群禽腺病毒分离鉴定与通用PCR检测及FAdV-4油乳剂灭活疫苗的研制》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、：厂＞．Ｉ：、霍－：Ｉ■：＜＇￥：．＿〈５一震＞＊囊：：一Ｉ＞一釋：１＇：：满一」：－」蠢：：：Ｂ３、義一．一：：１１：，：ｉ二義望＾ｉｌ％ｉｓ５ｌｌ２ｉＩｉ＿Ｂｉ？＿ｌｉ＃薦ｉｌｉｉ麗ｉｌｌｌ＿ｌ？＾？繼ｉｆｔｉｉ８ｔ？？ｓｉｉｉｌ靈騰分类号：S855.3单位代码：10183研究生学号：201385Z007密级：公开吉林大学博士学位论文Ⅰ群禽腺病毒分离鉴定与通用PCR检测及FAdV-4油乳剂灭活疫苗的研制IsolationandIdentification,UniversalPCRDetectionofGroupⅠFowlAdenovirusandDevelop

2、mentoftheInactivatedOilEmulsionVaccineFAdV-4作者姓名：刘吉山专业：兽医博士研究方向：兽医技术服务指导教师：柳增善教授培养单位：动物医学学院2018年6月＿ＰＣＲＦＡｄＶ－４Ｉ群禽腺病毒分离鉴定与通用检测及油乳剂灭活疫苗的研制ＩｓｏｌａｔｉｏｎａｎｄＩｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ，ＵｎｉｖｅｒｓａｌＰＣＲＤｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆＧｒｏｕｐＩＦｏｗｌＡｄｅｎｏｖｉｒｕｓａｎｄＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆｔｈｅａｃｃｎｅＦＡｄＶ－４ＩｎａｃｔｉｖａｔｅｄＯｉｌＥｍｕｌｓｉｏｎＶｉ作者姓名：刘吉

3、山专业名称：兽医博士研宄方向：兽医技术服务指导教师：柳增善教授学位类别：兽医博士培养单位：动物医学学院’论文答辩日期：２０１８年６月７日授予学位日期：年月日答辩委员会组成：姓名职称工作单位主席钱爱东教授吉林农业大学委员付殿国研宄员吉林省动物疫病预防控制中心王新平教授吉林大学于录教授吉林大学彭其胜教授吉林大学刘明远教授吉林大学丁壮教授吉林大学未经本论文作者的书面授权，依法收存和保管本论文书面版本、电子版本的任何单位和个人，均不得对本论文、修改、的全部或部分内容进行任何形式

4、的复制、发行出租、改编等有碍作者著作权的商业性使用（但纯学术性使。否则。用不在此限），应承担侵权的法律责任吉林大学博士（或硕士）学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交学位论文，是本人在指导教师的指导下，独立进行研宄工作所取得的成果。除文中己经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体己经发表或撰写过的作品成果。对本文的研宄做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：日期：如玄年Ｚ月■曰中文摘要Ⅰ群禽腺病毒分离鉴定与通用PCR检测及FAdV-4油乳剂灭活疫苗的研制

5、采集山东省、江苏省发病肉鸡、蛋鸡、麻鸭的病料，用SPF鸡胚分离了14株FAdV毒株，病毒均不能凝集鸡红细胞，56℃、65℃处理30min后病毒失活，pH3与pH9条件下处理60min不完全失活，能够抵抗4.4%体积的氯仿4℃处理10min；对Hexon蛋白部分基因进行测序分析与PCR-RELP定位病毒血清型，其中11株为FAdV-4血清型，其它3株分别为FAdV-8a、8b、11血清型；选择FAdVA-E5个种12个血清型病毒DNA聚合酶基因高度同源序列设计引物，建立了一种理论上可通用检测FAdV的PCR方法，具有敏感、特异、快速等特点，可检测2.8×102拷贝及以上的病毒DNA，

6、对鸡易感的DNA病毒EDSV、MDV、FPV检测均为阴性，检测阳性的新鲜病料均能分离到病毒，SPF鸡感染病毒后心、肝、脾、肺、肾、腺胃与肌肉样品检测均为阳性；克隆了FAdV-4分离株Hexon蛋白基因，其ORF均为2814bp，编码937个氨基酸，与已发布的4型病毒核苷酸、氨基酸序列高度同源，核苷酸序列同源性在97.1%~99.7%之间，氨基酸序列与PK-01株同源性高达99.8%，遗传进化树分析表明，我国流行的FAdV-4毒株分属独立的基因群体。选择分离的4个血清型病毒回归感染SPF鸡，发病症状、剖检病变与临床病例一致，即表现为羽毛蓬乱、呆滞、鸡冠苍白，有的在2~4天后耐过恢复，

7、剖检病死鸡可见典型心包积水、包涵体肝炎、肾脏肿胀，部分呈现腺胃出血、肌胃溃疡糜烂。将分离的FAdV-4病毒肌肉注射攻击SPF鸡，并测定病毒ELD50，结果表明，毒株致死率差异大，自40%到100%不等，ELD50同样差异较大，高的达10-7.84ELD50/0.2mL，低的仅为10-5.0ELD50/0.2mL，根据SPF鸡攻毒与ELD50测定结果，选择FAdV-4-sdbc-1作为制备灭活疫苗的候选毒株。为进一步保持种子的纯净性与稳定性，制备FAdV-4-sdbc-