副猪嗜血杆菌的分离鉴定与三价灭活疫苗的初步研制

《副猪嗜血杆菌的分离鉴定与三价灭活疫苗的初步研制》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、＇．■－Ｗ？、．－－，違ｋＬ、／＾巧．八打；這扛．Ｋ－、。－、＾、？．、：．―５５分类号：：：二少二乂学号Ｍ１２０１－、‘－分一＇？‘子．一‘－一ＵＤＣ＾．？？．密级：＿，＾聲朵＾＾＾竣叫义聲ｉＹＡＮＧＺＨＯＵＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ１ｌ＾—一ｊ（巧｜ｊ＾－，、、、ｆ？成＇‘’硕击学位冷义＾每扛若４＞＾去、＇护？許－？－；《、山１２／以側、令．－－－，－＊、：；．？．＿＾一副猪嗜血杆菌的分离鉴定与三价灭活疫苗的初步研制＾一易新健：义，皆奋＇、

2、’．；ｒ－聲＾－勢々＾．齐指导教师姓名；高巧教授．扬州大学，江苏扬州，２巧００９省ｇ产，＼一三、、一■，、．：■申请学位级别■：硕±学科专业名称：动物免疫学；论文提交日期；２０１５年４月论文答辩日期：２０１５年６月…２０１５年６月学位授予单位：扬州大学学位授予日期：：＇，ｒ，答辩委员会主席：Ｔ伊．＜污乂＾Ｖ＂．．．户，礙於顯争声私纖冷形＇片，丸：秦暫旅铃滅刺副猪嗜血杆菌的分幫鉴定与Ｈ价灭活疫苗的初步硏制．Ｉｓｏｌａｔｉｏｎａｎｄｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉ

3、ｏ打ｏｆ好幻６靡少片舶Ｓ公幻尸。通＊５ａｎｄｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｙｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆｔｒｉｖａｌｅｎｔｉｎａｃｔｉｖａｔｅｄｂａｃｔｅｒｉｎ研究生：易新健专业：动物免疫学导师：高疲教授扬州大学兽医学院２０１５年６月易巧健：副猪嗜血杆菌的分离鉴定与王价灭活疫苗的初步研制Ｉ副猪嗜血杆菌的分离鉴定与Ｈ价灭活疫苗的初步硏制研究生：易新健导师：髙核教授摘要副猪嗜血杆菌常存在于健康猪的上呼吸道，属于己斯德菌科嗜血杆菌属，在临床上主要引起猪的多发性浆膜炎和关节炎。近年来国内养

4、猪场副猪嗜血杆菌病的日益严峻，对各养殖场造成严重的损失。本研究主要对江苏省和安徽省养猪场的病死猪和健康猪进行副猪嗜血杆菌的分离鉴定，为副猪嗜血杆菌的防治提供依据。同时，本室巧步研制副猜嗜血杆菌血清４型、５型和１２型Ｓ价灭活疫苗，用ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠对其进行免疫保护力的评价。１副猪嗜化杆菌的分离鉴定在扬州大学动物医院和扬州某屠宰场进行样品采集，将其接种到巧克力培养基上培养，。对ＰＣＲ检测阳性的菌株进行纯化并保存通过ＰＣＲ检测副猪嗜血杆菌的１６ＳｒＲＮＡ。通过ＰＣＲ鉴定之后，从病死猪中分离到８株副猪嗜血杆菌；从健康猪

5、中分离到２６株。Ｈ副猪嗜血杆菌，其分离率为７．１２％对其中的株副猪嗜血杆茵进行基因测序，其测序结果与国内外分离株１６ＳｒＲＮＡ基因序列同源性均能达到９９％Ｗ上。对所有分离株用玻板凝集进行血清分型。在病死猪的分离株中血清５型３株、血清１２型２株。在健康猪的分离株中血清４型４株（１５．３８％）、、血清１４型１株及不可定型２株〇５型１株（３．８５％）、１１型３株（１１．５４／〇）、１２型１０株（３８．４６％）、１３型１株（３．８５％）及未定型菌株７株（２６．％％）。２副猪嗜血杆菌Ｈ价灭活疫苗的初步

6、研制用副猪嗜血杆菌血清４型、５型和１２型分离株分别对豚鼠进行腹腔攻毒。结果血清５１２）型和１２型菌株攻毒豚鼠全部死亡；血清４型菌株攻毒豚鼠死亡只（攻毒只。对死亡豚鼠进行剖检发现腹腔积液和胸腔积液及少量纤维素楼出，与副猪嗜血杆菌在病猪的症状相似。用Ｈ个不同剂量的副猪嗜血杆菌血清４型、５型和口型分离株分别对ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠进行腹脏攻毒Ｘ９。结果Ｈ个血清型的茜株攻毒剂量达到５．０１０ＣＦＵ时，ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠均死亡。９ｘ而攻毒剂量为ｌ．ＯｌＯＣＦＵ时，血清４型巧５型菌株攻毒小鼠均死亡１只（攻毒２只），而血清１２型

7、菌株攻毒小鼠未死亡。扬州大学硕壬学位论文ｎ９（含血清型菌袜各ｌｘ）Ｈ价灭活疫苗２（含用Ｓ价灭活疫苗１３个．ＯｌＯＣＦＵ、３个血９９清型菌株各２．〇ｘｌ〇ＣＦＵ）、Ｈ价灭活疫苗３（含３个血清型菌株各４．〇ｘｌ〇ＣＦＵ）及商品灭活疫苗分别对ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠进斤皮下免疫２次，二次免疫后１４天，对各小鼠进行腹腔攻毒。结果Ｈ价灭活苗免疫组１和２与商品疫苗免疫组对４型和５型菌株的抵抗力相当，保护率为。４０％左右。但在对１２型菌株的抵抗力上，Ｈ价灭活疫苗免疫组１和２的保护率达到６０／。，而商品疫苗的保护率只有２０％

8、。Ｈ价灭活疫苗免疫组３对４型和５型菌株的免疫保护率要比商品疫苗免疫组保护率高２０％，保护率为６０％。在对１２型菌株的抵抗力上，Ｈ价灭活疫苗免疫组３的保护率要