酶膜耦联反应降解酪蛋白制备抗菌肽

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1、2014年第12期第12期（总第373期）农产品加工No.122014年12月FarmProductsProcessingDec.文章编号：1671-9646（2014）12a-0001-03酶膜耦联反应降解酪蛋白制备抗菌肽*方颖莹，夏明（浙江中医药大学药学院，浙江杭州310053）摘要：利用木瓜蛋白酶降解分离酪蛋白，采用间歇式酶解反应、间歇式膜分离反应、酶膜耦联反应3种不同的模式制备抗菌肽，以金黄色葡萄球菌为指示菌，用比浊法测定抑菌率。结果表明，间歇式酶解反应所得的抑菌肽抑菌效果最差；间歇式膜分离反应组酶解时间7min的透过液抑菌

2、效果最好，抑菌率达23.60%；酶膜耦联反应分离后分子量<4kDa的组分抑菌效果最佳，透过液抑菌率最高达24.10%。将酶解反应与膜分离耦合来水解酪蛋白，发现水解物的不同分子量成分与抑菌效果有关，证明此方法可用来工业化生产抗菌肽。关键词：酪蛋白；酶膜耦联反应；抗菌肽；抑菌率中图分类号：TQ936文献标志码：Adoi：10.3969/jissn.1671-9646（X）.2014.12.001ProductionofAntibacterialPeptidesbyDegradationofCaseininEnzymaticMembran

3、eReactorFANGYing-ying，*XIAMing（CollegeofPharmacy，ZhejiangChineseMedicalUniversity，Hangzhou，Zhejiang310053，China）Abstract：Usingthreedifferentmodes（batchenzymaticreaction，batchmembraneseparationandenzymemembranecouplingreaction）topreparateofantibacterialpeptides，methodtu

4、rbidimetryisusedtomeasureantibacterialratewithStaphylococcusaureusasindicator.Theresultsshowthattheantibacterialeffectofbatchenzymaticreactionistheworst，inbatchmembraneseparation，digestingtime7minutesgrouphasthebestantibacterialeffect，theinhibitoryratereached23.60%，the

5、antibacterialeffectofmembraneseparationcouplingreactionwithmolecularweightof<4kDaisthebest，andhydrolysate'santibacterialrateisupto24.10%.Studyingenzymemembranecouplingreactionfindsthattheantibacterialeffectisassociatedwithmolecularweight，andprovesthatthismethodcanbeuse

6、dforindustrialproductionofantimicrobialpeptides.Keywords：casein；enzymemembranecouplingreaction；antibacterialpeptide；antibacterialrate抗菌肽（Antibacterialpeptide）是生物体内存在产物分离纯化的一体化，消除了产物抑制现象。的一种具有抗菌活性的小分子蛋白，具有广谱抗菌搭建酶膜耦联反应装置，保持温度35℃，维持[6]活性，细菌不易对其产生耐药性，同时对病毒、某体积、pH值、搅拌速率恒定，以

7、木瓜蛋白酶水解[1]些肿瘤、真菌均有一定抑制作用，因而在医药及保酪蛋白，运用酶膜耦联法分离制备抗菌肽，以金黄健方面具有广阔的开发前景。抗菌肽主要通过从动色葡萄球菌为指示菌，研究酶膜耦联法生产抗菌肽植物组织中直接提取法、化学合成法、基因工程法、的可行性，为其工业化生产提供多种选择。[2]酶解法来制备。目前，普遍采用酶解法生产抗菌1材料和方法肽，存在酶解产物过度水解、酶解时间长、酶回收再利用困难、酶用量大、酶解不均匀，以及制备成1.1试剂与仪器[3]本较高等缺陷。酶膜耦合技术是将超滤设备和酶解酪蛋白（食品级），临夏州华安生物制品有限责反

8、应器连接起来，集酶促水解、催化剂回收再用、任公司产品；木瓜蛋白酶（80万U/g），安琪酵母股产物分离纯化、苦味肽脱除等多步工序于一体，是份有限公司产品；肉汤培养基，杭州微生物试剂有[4]实现连续操作的有效模式，具有降低酶损耗、提高限公