种贝的胚胎和3种贝的精子超低温冷冻保存的研究

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1、Y14053S3分类号UDC’‘学校代码10566学号垫Q§螋l鲣Q密级～广东嗨i莩大学硕士学位论文2种贝的胚胎和3种贝的精子超低温冷冻保存的研究王鹏飞论文提交日期2QQ墨生．叠．且一2种贝的胚胎禾口3种贝的精子超低温冷冻保存的研究摘要目的：以二甲基亚砜为冷冻保护剂，研究马氏珠母贝、近江牡蛎胚胎冷冻的条件，并利用已有的马氏珠母贝精子冷冻程序，对菲律宾蛤仔、环沟格特蛤和巴非蛤的精子进行冷冻保存。本研究的目的是尝试建立贝类胚胎和精子超低温冷冻保存的基本程序。主要内容：1．加入抗冻保护液后，平衡时间及保护液浓度的确定：取即将冷冻

2、的胚胎，加入DMSO，终浓度为12％、14％、16％和18％，置于0"---'4℃下观察，30min后将胚胎置于室温(25℃)左右，观察胚胎活力恢复情况，确定冷冻胚胎过程中抗冻保护液平衡时间和抗冻保护液浓度；2．马氏珠母贝不同发育时期胚胎冷冻的研究：取不同发育时期的马氏珠母贝胚胎，加入抗冻保护液，经平衡后投入LN中。经35℃水浴解冻胚胎，镜检观察存活率，将存活的胚胎和幼虫放入海水中培育，观察存活和发育情况；3．冷冻牡蛎胚胎的研究：对牡蛎胚胎进行冷冻，一段时间后解冻观察牡蛎胚胎存活情况，将存活的胚胎和幼虫放入海水中继续培育，

3、观察发育存活情况；4．菲律宾蛤仔、环沟格特蛤和巴非蛤精子冷冻的研究：解剖性腺发育良好的雄贝，将成熟的精子加入抗冻保护液，冷冻保存一段时间后，经37,--．,40。C水浴解冻，镜检存活情况，确定抗冻保护液的最佳浓度。结果：1．确定了抗冻保护液平衡时间及浓度：加入抗冻保护液后平衡30min，冷冻保存，解冻观察存活率，确定抗冻保护液最佳浓度为14％；2．冷冻马氏珠母贝不同发育时期胚胎存活差别较大：冷冻保存马氏珠母贝D形幼虫，解冻后得到的存活率较高为54．2％，其他发育时期存活较少；3．牡蛎胚胎存活情况：解冻牡蛎胚胎观察，囊胚期存

4、活率为33％，原肠期存活率为39％，担轮幼虫存活率为45．5％，存活率随发育时期的不同和抗冻保护液的浓度不同而改变。4．3种贝类的精子冷冻存活率较高时抗冻保护液浓度：解冻后的精子，部分能够正常受精，受精卵正常发育，同步性较差。当抗冻保护液浓度为10％时，精子存活率较高。结论：当抗冻保护液浓度为14％时，冷冻保存马氏珠母贝及近江牡蛎的胚胎，得到的存活率较高。不同种生物胚胎的不同发育时期存活情况不同，随着胚胎发育，冷冻保存得到的胚胎存活率升高。马氏珠母贝D形幼虫存活率较高，而牡蛎胚胎发育的几个时期均有一定的存活，担轮幼虫存活率

5、较高。当抗冻保护液的浓度为10％时，冷冻保存几种贝类精子的存活率较高。关键词：马氏珠母贝，近江牡蛎，菲律宾蛤仔，环沟格特蛤，波纹巴非蛤，胚胎，精子，超低温冷冻Studyoncryopreservationofshellfishembryoof2SDeclesanllSDerm0ljSDecles●1p^●Abstractobjective：UsingDMSOasantifreezeprotectiveagent．studytheconditiontofreezeembryoesofPinctadamartensiiandO

6、strearivrularisGould．AndfreezethespermsofRuditapesphilippinarum、KatelysiarimularisandPaphiaundulatabasedonfreezingprocedureofspermofPinctadamartensii．Theobjectiveofresearchwastrytoestablishbasicprocedureoffreezingshellfishembryoesandsperms．Maincontains：1．Todetermi

7、nethetimeofinfiltratingafteraddingtheantifreezeprotectiveagent．Andtodeterminetheconcentrationoftheantifreezeprotectiveagent．Theembryowereplacedin0～4"0addingDMSOasantifreezeprotectiveagent．Theconcentrationofantifreezeprotectiveagentwere12％、14％、16％and18％．After30mini

8、testheembryoeswereplacedatroomtemperatrue．Observethevitalityofembryoestodeterminethetimeofinfiltratingandconentrationofantifreezeprotectiveagent．2．Tostu