甘肃省曲霉菌的RAPD分析和ITS序列分析

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1、甘肃农业大学硕士学位论文甘肃省曲霉菌的RAPD分析和ITS序列分析姓名：刘艳梅申请学位级别：硕士专业：植物病理学指导教师：朱建兰20060601Y937323甘肃农业大学2006磊硕士学位论文摘要从2004年3月开始，分别在甘肃的敦煌、武威、张掖、天祝、兰州、白银、定西、天水、武都等地的土样和昆虫上采集并分离曲霉菌，发现甘肃省曲霉资源很丰富，对分离到的曲霉菌进行常规形态鉴定和分子鉴定，并探讨二者之间的关系。主要结果如下：1．在曲霉传统分类鉴定中，由于其种类多、且种间具有较大的相似性，因此根据形态特征进行分

2、类鉴定具有较大的难度。本研究采用随机扩增多态性DNA(RAPD)分析和核糖体(rDNA)内转录间隔区(ITS)序列分析方法对14种曲霉进行分类鉴定与系统发育研究，以期望能为该属真菌分子系统学的研究提供新的资料。2．14个随机引物对14种曲霉的扩增图谱中，没有发现所有曲霉的共有带。14个随机引物扩增得到的211个RAPD位点中，有164个多态性位点，多态性位点频率占77．73％，表明了供试菌株间存在着丰富的多态性。试验中所用14个引物的RAPD图谱能够较客观地反映出供试菌株间亲缘关系的远近。3．基于菌株间的

3、相似性系数分析和应用Between—groupslinkage法构建的聚类树状图，显示出不同的曲霉种间只在较低的相似性系数聚为一类，这与形态特征分种基本吻合，反映了形态学分类的分子遗传本质，同时也表明了应用RAPD技术进行曲霉亲缘关系分析的种类鉴定具有合理性和可行性。4．本研究还选取了部分形态学上的近似种和疑难种进行ITS序列分析。分别对6个菌株的ITS区(ITSl和ITS2)及5．8SrDNA进行了序列测定，所有序列经排列并用Mega3．0软件进行分析得出最简约系统发育树。测序结果表明，形态上相似的几种

4、曲霉彼此之间的绝对遗传距离大于11个碱基，属于种间的差别范围。关键词：曲霉；RAPD分析；rDNAITS序列分析：种类鉴定苗京寂业大学2006届碛圭学位论灾SummaryA．

5、wergittussampleswerecollectedfromsoilsamplesandinsectsamplesofDoughuang、Wuwei、Zhangye、Lanzhou、Baiyin，Dingxi、Tianshui、TianzhuandWuduinGansuprovinceinMarch,2004．Therewer

6、emanykindsofAspergillusinGansuprovince，AspergiItusWaSidentifiedaccordingtomorphologyandmolecularmethods．Therealationshipofthemwasstudied．too．Therewerefourmainresults，Fristly,inthetraditionalclassificationandidentificationofthegenusAspergiltus，itWaSdifficu

7、lttoidentifyspeciesaccordingtomorphologicalcharacteristicsbecauseofthegreatnumberofspeciesandthehighsimilarityamongthem，WiththeanalysisofRAPDandITS(rDNA)sequences，thisstudywasmadeofclassification、identificationandphylogenyof14speciesofAspergillus，whichcou

8、ldprovidenewinformationforthemolecularphylogeneticstudyofgenus．Secondly,intheRAPDprofilesgeneratedby14randomprimers，therewerenoRAPDbandssharingwithallthe14species，whichrevealedtheabundantpolymorphismamongthetestedisolates．Meantime，14randomprimerscouldbest

9、ablyamplifiedthegenomicDNAfromthetestedstrainsandobtained21tRAPDbands。Therewere164polymorphiclociand77．73％waspolymorphism．AlltheRAPDprofilescouldobjectivelyshowtherealationshipsamongthetestedisolates。Thirdly,inthecl