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1、棉花学报CottonScience2013袁25渊1冤院90~94应用纳米磁珠荧光PCR检测棉花曲叶病毒张永江1袁李明福1袁辛言言1袁李桂芬1袁马洁1袁邓丛良2渊1.中国检验检疫科学研究院袁北京100029曰2.北京出入境检验检疫局袁北京100026冤摘要院为了提供快速灵敏检测棉花曲叶病毒(Cottonleafcurlvirus,CLCuV)的技术以防止其传播扩散袁本研究根据CLCuV外壳蛋白基因渊Coatprotein,CP冤保守序列设计了引物和TaqMan探针袁并结合纳米磁珠(Magneticnanoparticles,MNPs)建
2、立了该病毒的MNP实时荧光PCR(Real-timePCR)检测方法遥该方法检测阈值约为525fg窑滋L-1DNA遥通过对CLCuV尧非洲木薯花叶病毒尧烟草线条病毒尧黄瓜花叶病毒及番茄斑萎病毒的检测表明袁该方法具有良好的特异性曰同时该方法无需任何PCR后处理袁交叉污染风险小遥本方法可用于CLCuV的快速检测遥关键词院棉花曲叶病毒曰实时荧光PCR曰检测中图分类号院S562.62文献标志码院A文章编号院1002-7807(2013)01-0090-05111112ZHANGYong-jiang,LIMing-fu,XINYan-yan,LI
3、Gui-fen,MAJie,DENGCong-liang渊1.100026,冤Fordevelopingarapidandsensitivedetectiontechniquetodetectcottonleafcurlvirus(CLCuV)inordertopreventitsintroductionandspread,wehavedevelopedaReal-timeTaqManPCRcombiningwithmagneticnanoparticles(MNPs)method.ByusingTaqManprobecombining
4、withMNPstechniqueandcoatproteingeneasthetargetgene,theMNPfluorescentPCRdetectionmethodwasestablishedafterspecificityandsensitivityexperiments.Thesensitivityofthemethodwas525fg窑滋L-1ofDNA,whichwassamethatoftheconventionalPCRgelelectrophoresismethod.Thegoodspecificityofthis
5、methodwasevaluatedbyapplyingtheproposedmethodtodetectfiveviruses,CLCuV,Africancassavamosaicvirus(ACMV),Tobaccostreakvirus(TSV),Cucumbermosaicvirus(CMV)andTomatospottedwiltvirus(TSWV).TheMNPfluorescentPCRmethodwasrapidandaccurateforCLCuVdetectionoffieldleafsamplesandcould
6、reducetheriskofcross-contaminationwithoutanyPCRpost-processing,whichisafeasibletechniquetoroutinetestingassays.cottonleafcurlvirus;real-timePCR;detection棉花曲叶病毒渊Cottonleafcurlvirus,CLCuV冤侵染棉花导致棉花曲叶病(Cottonleafcurldis-为双生病毒科渊冤菜豆金色花叶病毒ease,CLCuD)袁造成严重的经济损失曰在巴基斯[1]属()成员袁目前该病
7、毒主要分布在坦袁仅1992－1995年间CLCuD造成的经济损失[3]巴基斯坦尧印度尧苏丹尧埃及尧尼日利亚尧马拉维和就超过50亿美元遥我国是世界上最大的棉花生[2]南非等地区曰自然寄主有海岛棉尧咖啡尧黄葵尧黄产国和消费国袁然而我国的棉花生产正面临着[4]麻尧木槿等曰可通过烟粉虱(Genn.)尧CLCuV的严重威胁院一方面袁新疆棉区是我国苗木及嫁接传播曰是危害棉花的重要病毒之一袁最大的产棉区和优质棉生产基地袁其棉花生产对收稿日期院2012-06-12作者简介院张永江渊1977-冤袁男袁博士袁副研究员袁zhangyjpvi@yeah.net
8、基金项目院质检公益性行业科研专项野油菜茎基溃疡病菌尧亚洲梨火疫等28种重大入侵性植物病原物侦测技术及标准研究冶渊201010256冤曰野基于纳米磁珠植物病毒高灵敏自动化检测研究冶渊201110035冤曰野鳄
