应用纳米磁珠实时荧光定量PCR方法检测番茄黄化曲叶病毒-论文.pdf

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1、植物病理学报ACTAPHYTOPATHOLOGICASINICA44(2)：221—224(2014)应用纳米磁珠实时荧光定量PCR方法检测番茄黄化曲叶病毒赵晓丽，周琦，孙宁，邓丛良(北京出入境检验检疫局植物实验室，北京100026；。东南大学，南京210096)Detection0f‘r0matoyellow，eafcurlvirusbyreal—timequantitativePCRcombiningwithmagneticnanoparticles{A0Xiao—li，Qi，SUNNing，D】NGCong—liang(Plant

2、Labo—ratoryofBeijingInspectionandQuarantineTestingCenter，neijing1(ID'26，China；SoutheastUniversity，Nanjing210096，China)Abstract：Inordertodeveloparapid，sensitiveandspecificqPCRassayfordetectionandquantificationofTomatoyellowleafcurlvirus(TYLCV)，apairofprimersandTaqManprobe

3、weredesignedaccordingtotheconservedsequenceofknownTYLCVisolates．CombiningwithMtechnique．anovelM一qPCRdetectionmethodwasestablishedandverifiedbasedonspecificity。sensitivityandreproducibilitytests．Theresultsindica-tedthattheCtvalueofplottedstandardcurveshowedgoodlinearrelat

4、ionship(R=0．9994)withthelogofcopynumberoftemplate．TheestablishedmethodshowedahighspecificityforTYLCVdetectionwithoutcrossingreactionwithTomatoseverefearCUrlvirusandTomatoyellowleafCUrlSadiniavirus，andwas10-foldmoresensitivethanroutinePCR．Bothcoefficientsofvariationwerele

5、ssthan2％．indicatingagoodreproducibility．WehaveprovidedanovelmethodfordetectionofTYLCVinplantsamplesrapidlyandquantitatively．Keywords：TomatoyellowleafCUrlvirus；detection；MNP；qPCR文章编号：0412—0914(2014)02—0221—04番茄黄化曲叶病毒(Tomatoyellowleafcurlvi—基本、最关键的步骤，它是下游核酸检测的基础。近ins，TYLcV

6、)为双生病毒科(Geminiviridae)菜豆金年来出现的通过纳米磁珠(magneticnanoparticles，色花叶病毒属(Begomovirus)成员，于1964年在以MNP)法提取植物核酸，避免了植物寄主中多糖及色列首次发现J，目前我国已有l5个省(自治区、直一些酚类物质对PCR反应的影响，有效克服了传统辖市)发现该病毒J，cV主要通过烟粉虱传核酸提取方法步骤繁琐、耗时长、收率低、接触有毒播。试剂、难以实现自动化等缺陷，该方法已应用于部分植物病毒的检测J。本研究通过纳米磁珠提取样品随着分子生物学技术的不断发展，许多快速高效的

7、检测TYLCV的方法被建立并应用于实际检中核酸，与实时荧光定量PCR技术结合，建立了TⅥCV的MNP-qPCR检测方法。测，其中以PCR技术最具实用性。研究表明PCR技术是TYLCV检测的有效手段之一，而实时荧1材料与方法光定量PCR(real—timequantitativePCR，qPCR)不仅比普通PCR更加快速、灵敏J，而且能够对模板1．1材料进行准确定量。核酸提取是现代分子生物学操作最CV阳性材料采自北京田间番茄样品。番收稿日期：2013-07—03；修回日期：2013—10-09基金项目：公益性行业(质检)科研专项(2011

8、10035)通讯作者：邓丛良，高级农艺师，主要从事植物病毒检测技术研究；E-mail：dengcl@bjciq．gov．cn。植物病理学报44卷茄重型曲叶病毒(Tomatosevereleafcurlvir