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《软骨细胞的永生化及其生物学特性》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、中华创伤杂志’$$%年%月第%7卷第%期K8(0V?+-4)-,*.，V-04-+1’$$%，>*.S%7，N*S%·’!··骨与软骨组织工程·软骨细胞的永生化及其生物学特性何清义李起鸿许建中软骨由软骨细胞、胞外基质（胶原纤生化”转化，较常用的方法是把编码癌蛋化，如神经前体细胞、肝细胞、角朊细胞、维、蛋白多糖）及水组成。其中后两者所白的外源性遗传信息如)12、034、腺病毒巨噬细胞、星形细胞、小肠上皮细胞和软［!］占比例较大，软骨细胞数量较少，所以从5%6、人类乳头瘤病毒57片段（84)-0骨细胞。对于软骨细胞而言，B>&$
2、［%］软骨中获得软骨细胞来源有限；并且9-9(..*)-:(+4;，<=>57）、类人猿病毒&$大C?6@最常用，B>&$为FS’GE双环状的软骨细胞增殖能力低，代谢缓慢，体外培?抗原基因（;()(-0:(+4;&$.-+@3?-0,(AON6病毒，其基因组分为早期基因（包括养对密度高度依赖，且为有限增殖，传代@30，B>&$C?6@）转入靶细胞，它们使生大?、小,抗原基因）和晚期基因（>=%、到第"代左右，细胞出现老化现象，使传长抑制基因DE（+3,(0*E.-;,*)-@303，DE）>=’、>=!基因），前者编码转录活
3、化因子代难以为继。特别是软骨细胞在体外长和（或）9F!功能失活，突破细胞周期抑（,+-0;2+(9,(*0-2,(:-,*+;），刺激病毒和宿主期培养有去分化的趋势，表型（特别是!制关卡（2832G9*(0,），从而使靶细胞在细细胞的转录与增殖；后者负责编码病毒型胶原）难以保持［’］。上述这些问题，都胞周期中循环增殖而达到永生化［!，&］。的结构蛋白，然后包装病毒的基因组，并［%’］是软骨细胞库建立及软骨细胞工程必须基因或基因片段在转入靶细胞之形成病毒颗粒。目前多用B>&$C?6@解决的难题。因此，众多学者一直试图前，必须要
4、选择一个合适的载体（:32A片段去转染细胞，从而获得鼠、兔、人等建立一种能够长期培养、表型稳定的永,*+），载体是携带目的基因并将其转移至哺乳动物的永生化软骨细胞。?-G-/-T-［%!］生化软骨细胞。靶细胞内复制和表达的运载工具，载体等用温度敏感型B>&$C?6@转化小鼠一、永生化的定义及意义的选择是基因转染的关键之一。基因或的关节软骨细胞，得到永生化小鼠软骨所谓“永生化”（())*+,-.(/-,(*0），就是基因片段在大肠杆菌内的扩增或表达通细胞（命名为?KM），它能够表达!型胶指细胞处于连续的细胞周期而终止其发常以质
5、粒为载体，真核体细胞则多用病原等相关基因，再把?KM种植于鼠髌股育进程，通俗一点说就是“使细胞获得了毒作为载体（但也有用质粒为载体直接骨沟中部的全层缺损中，M周后，这些细［!］无限的增殖能力”。建立永生化细胞进行基因转染的）。常用的病毒载体有胞产生大量软骨样基质（2-+,(.-@(*4;)-A至少具有以下几点优势："可以在体外逆转录病毒（+3,+*:(+4;，D>）和腺病毒,+(U），它们的细胞形态也接近于正常软研究软骨细胞的分化与生长及增殖之间（-H30*:(+4;，6>），以及可携带大容量目骨细胞。该实验证明，基因工程转
6、化的的关系。#永生化的软骨细胞可以考虑的基因的载体如酵母人工染色体（13-;,永生化小鼠软骨细胞能够有效修复关节作为软骨细胞工程的细胞库或基因治疗-+,(I(2(-.28+*)*;*)3，J6K）、哺乳动物人软骨全层缺损。其他一些学者也相继建的靶细胞，前者为软骨组织工程提供大工染色体（)-))-.(-0-+,(I(2(-.28+*)*A立了鼠的永生化软骨细胞系并用于各种量的经过预先处理和优化的软骨细胞，;*)3，L6K）等，后两者可携带%$ME9级实验，V*80;*0等［F］就利用鼠永生化肋软真正做到“组织工程化”；后者则使
7、基因基因，是人类基因组研究的有力工具。骨细胞系（?K’#）来研究软骨细胞分泌无治疗应用于软骨细胞成为可能，因为正目前应用较多的是D>载体，D>为DN6机焦磷酸盐的机制；<*+,*0等［M］则用永常软骨细胞传代、增殖有限的缺点妨碍病毒，含’条相同的DN6分子，携带目生化鼠软骨细胞作为骨关节炎的实验模了基因转染阳性靶细胞的挑选、鉴定及的基因（B>&$C?6@、)12）和新霉素抗性型，研究了各种细胞因子与软骨基质金回输。$可以作为药理或毒理研究的标基因（03*+）筛选标志的D>能稳定地整属蛋白酶（)-,+(U)3,-..*9+*,
8、3(0-;3，LL=）准细胞。%有利于对各项实验结果进行合入软骨细胞，使软骨细胞向永生化转的关系（LL=与骨关节炎时软骨基质的比较，因为各个实验室的软骨细胞来源化［FA"］。降解密切相关）。不同，培养方法各异，传代千差万别，使哺乳动物细胞的基因转染方法很B,3()E3+@等［7］把B>&$
