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《pei-spio标记对关节软骨细胞生物学特性的影响》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、PEI-SPIO标记对关节软骨细胞的生物学特性的影响林肖1，王玲1，陈加荣1，林兴德2，杨柳1（400038重庆，第三军医大学西南医院关节外科1；266011山东青岛，济南军区青岛第一疗养院理体疗科2）[摘要]目的研究聚乙烯亚胺（polyethylenimine，PEI）包被的超顺磁性氧化铁粒子(superparamagneticironoxid，SPIO)对透明软骨细胞增殖和分泌Ⅱ型胶原蛋白功能的影响，探讨其标记软骨细胞的适宜标记浓度和适宜孵育时间。方法取1～3月龄巴马小香猪后膝关节透明软骨体外培养的第2代细胞，以Fe浓度为2、4、6、8、10
2、、12、14μg/mL浓度的PEI-SPIO标记液标记的软骨细胞为实验组，没有PEI-SPIO标记的软骨细胞作为对照组，分别在37℃培养箱中培育6、12、18、24、30h，通过普鲁士蓝染色、透射电镜、细胞内铁含量、WST-1和半定量RT-PCR法检测，筛选出PEI-SPIO的最佳标记浓度和最佳孵育时间。结果6、8、10、12、14μg/mL组标记后的普鲁士蓝染色显示90％以上的细胞被铁粒子标记；细胞内铁含量的测定发现结果显示标记时间超过24h，各组细胞内铁含量基本不再增加；WST-1检测磁颗粒标记的细胞毒性结果显示，对照组与实验组无显著统计学差
3、异（P>0.05）。8μg/mL标记的软骨细胞，其Ⅱ型胶原蛋白RT-PCR条带的灰度值与内参条带灰度值的比值与未标记软骨细胞比较有明显降低[（13.04±0.60）％vs（18.89±1.26）％，P<0.05]；6μg/mL标记的软骨细胞，其条带的灰度值比值与未标记软骨细胞比较无明显差异[(27.32±1.02)％vs（28.56±1.15）％，P>0.05]。结论PEI-SPIO可达到安全有效标记软骨细胞的要求，PEI-SPIO标记液铁浓度为6μg/mL，标记24h是PEI-SPIO标记软骨细胞的适宜标记浓度和标记时间，既可达到标记软骨细胞的
4、目的，又不对软骨细胞的活性、增殖和Ⅱ型胶原蛋白基因的表达造成影响。[关键词]SPIO；透明软骨细胞；磁标记[中图法分类号]R336[文献标志码]ABiologicalCharacteristicsofSuperparamagneticIronOxidewithAmphiphilicPolyethylenimineLabeledCartilageCellsLinXiao1,WangFengling1,ChenJiarong1,LinXingde2,YangLiu1（CenterforJointSurgery,SouthwestHospital,Th
5、irdMilitaryMedicalUniversity,Chongqing，400038，China）AbstractObjectivesToinvestigatetheeffectsofsuperparamagneticironoxide(SPIO)coatedwithamphiphilicpolyethylenimine（PEI）ontheproliferationandthetypeIIcollagensecretionoflabeledarticularchondrocytes,anddeterminetheoptimallabelin
6、gconcentrationandincubationtimeofPEI-SPIO.MethodsChondrocytesfromthekneejointsofBamamini-pigs(1-3monthsold)wereharvestedandcultured.CellsinpassagetwowerelabeledwithPEI/SPIOattheconcentrationof2,4,6,8,10,12,14μg/mlasexperimentgroup,andcellsnon-labeledascontrolgroup,andincubate
7、din37℃for6,12,18,24,30hoursrespectively．LabeledcellswerecomparedwithunlabeledcellsbyPrussianbluestaining,transmissionelectrontest,intracellularironcontenttest,WST-1testandhalfquantitativeRT-PCRtesttoevaluatetheeffectsofSPIOoncartilagecellsforscreeningthebestlabelingconcentrat
8、ionandtime.ResultsPrussianbluestainingshowedthatmorethan90%ofchondro
