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1、山东农业科学JournalofShandongAgriculturalScience1998年 第5期3蛋白质电泳技术的改良及其应用效果颜廷进 李 群 杨平平 刘爱峰 谭振新(山东省农业科学院作物研究所 济南 250100)提 要 以玉米杂交种及部分自交系为材料,利用改良的蛋白质电泳技术进行纯度鉴定。改进后的技术,鉴定周期缩短近一倍,成本显著降低,技术操作可行性强,重复性好。检测数据经田间种植鉴定、相关性和一致性分析证明,蛋白质电泳和田间种植鉴定两种检测方法结果一致,电泳技术可以作为品种纯度鉴定的可靠方法。关键词 球蛋白 电泳技术 改良 相关性Improvement
2、ofProteinElectrophoresisTechnologyandItsApplicationEffectsYanTingjin,LiQun,YangPingping,LiuAifeng&TanZhenxin(CropInstitute,ShandongAcademyofAgriculturalSciences,Jinan250100)AbstractByaseriesofexperiments,theproteinelectrophoresistechnologywasimproved,itwoulddecreasethecostandshortenthe
3、periodofwholeprocedure.Thepurityofsomemaizehybridsandinbredlinesweretestedbythismethodandfieldplantingrespectively,correlationanalysisrepresentedthesame.Asaresult,theimprovedproteinelectrophoresistechnologycanbeusedtoidentifyvarietypspurity.KeywordsGlobulin,proteinelectrophoresistechno
4、logy,correlationanalysis 品种纯度是农作物种子分级的重要指标,有些技术环节不适合大量种子纯度检测,部分它直接关系到品种产量的高低及品种推广。操作步骤可以简化。针对以上情况,我们做了目前国内外还没有一种合适的检验技术快速大量研究,提出具体修改内容,完善整个操作地测定玉米品种纯度。传统的形态学鉴定法、程序,以供同行参考借鉴。为验证该技术的可〔1〕生理生化分析法、田间种植鉴定法,或者结信度,又进行了田间种植符合程度的研究及相果不够准确,或者鉴定周期太长;某些高新技关性分析。现将研究内容报告如下。术如等电聚焦电泳法、RAPD和RFLP分析技1 材料
5、与方法〔4,5〕术、HPLC技术等,或操作技术要求高,或1.1 仪器与材料 采用北京六一仪器厂生成本昂贵,重复性差,不能很好地推广利用,限产的多功能电泳仪和电泳槽。所用18个玉制了这些技术的发展。90年代初建立起来的〔2,3〕米杂交种及自交系材料均来自送检样品。玉米蛋白质电泳技术,基本解决了纯度鉴〔2〕1.2 蛋白质提取 参照周展明等的方法定问题,但是经过我们近3年实际操作,发现进行。收稿日期:1998-05-063本文经山东省农业科学院作物研究所黄承彦研究员审阅,特此致谢。19©1995-2006TsinghuaTongfangOpticalDiscCo.,Ltd
6、.Allrightsreserved.1.3 电泳技术 依据传统的电泳技术,进行见表1、图1。从表1中可以看出,田间种植部分改进,删除浓缩胶,在25℃室温条件下,鉴定与电泳技术测定之差在-316～619范首先采用15分钟140V低电压电泳,待样品围内,其中掖单13号在纯度为9113%情况聚集成单一界面层后,再升至450V电压电下,两者之差仅有-012。也有个别品种纯度泳至指示剂距底部1cm处停止。较低,如鲁原92号纯度为7812%,两者之差达619,但大多数品种在-3～3范围内波动。2 结果与分析分析后的数据表明,两种检测方法的结果相332.1 电泳结果 从电泳图谱
7、(见封三:蛋白关系数r=01925,相关达极显著水平,从质电泳技术的改良及其应用效果图版)可以而说明利用改良的电泳技术测定玉米品种纯看出,在有浓缩胶的情况下,450V电压电泳5～6分钟,蛋白质分子就能形成单一的界面层。去掉浓缩胶后,由于电压降至140V,蛋白质分子移动速度相对减慢,在15分钟后形成单一界面层,界面层形成后,电压再升至450V。试验证明,两种方法电泳结果基本一致,表明改良后的电泳技术是可行的。2.2 田间种植鉴定与电泳技术纯度鉴定结果 以18份玉米品种材料为试验样品,利用改进的电泳技术进行纯度鉴定,同时,将这18份材料按照国家有关检验标准进行田间图
