蛋氨酸、赖氨酸及其二肽对奶牛乳腺上皮细胞酪蛋白αS1基因表达的影响

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1、浙江大学硕士学位论文蛋氨酸、赖氨酸及其二肽对奶牛乳腺上皮细胞酪蛋白α<,S1>基因表达的影响姓名：杨金勇申请学位级别：硕士专业：动物营养与饲料科学指导教师：刘建新;吴跃明200605012006年浙江大学硕士学位论文图表索引图1．激素调控乳腺乳蛋白分泌途径图2．乳腺上皮细胞利用肽的可能方式。图3．四种不同方法收集的上皮细胞Mrr细胞增殖分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯图4．组织块培养图5．MTT细胞增殖分析时形成的紫色甲璜结晶图6．组织块培养消化收集的细胞Giemsa染色⋯⋯⋯13⋯⋯⋯18图7．蛋氨酸浓度对乳腺上皮细胞酪蛋白aII基因表达的影响图8．蛋氨酸二肽和蛋氨酸对酪蛋白a。1基因

2、表达的影响2930313839图9．蛋氨酸赖氨酸二肽和蛋氨酸、赖氨酸对酪蛋白d。l基因表达影响比较⋯⋯40图lO．添加不同形式氨基酸SDS-PAGE结果图11．蛋氨酸二肽添加浓度对酪蛋白a，l基因表达的影响⋯⋯⋯⋯圈12．赖氨酸与蛋氨酸比例对酪蛋白ot,1基因表达的影响表1．牛奶中的主要蛋白质的比例⋯⋯⋯⋯⋯表2．牛乳蛋白中必需氨基酸的含量⋯⋯⋯。表3．两种酶消化奶牛乳腺组织的效果比较．．．⋯．．．⋯．．．8．41424510ll2006年浙江大学硕士学位论文致谢本论文是在导师刘建新教授悉心指导下得以顺利完成的。值此硕士学位论文完成之际，谨向三年来倾心指导我的导师刘建新教授

3、致以最诚挚的敬意与衷心的感谢。在攻读硕士学位期间，深深感受到导师渊博的知识、博大的胸怀、一丝不苟的工作作风、严谨的治学态度、忘我的工作精神和创新的科学理念，这些都时刻激励着我并将成为我受益终身的宝贵财富。吴跃明教授在试验设计和实施过程中给予了精心指导，叶均安副教授在为人处世方面给了我极大的影响，张才乔教授在细胞培养实验中给了我细心的指导和帮助，在这里学生向各位老师表示深深的感谢l在课题实施过程中，得到了赵学军师兄的指导；在论文研究过程中吴慧慧同学、来金良同学一起参与，一起讨论试验得失，从他们那里得到许多启迪；实验室的所有成员和我的室友在生活和试验中给了我奠大的帮助，在此一并

4、表示感谢。本论文得到国家“十五”奶业重大科技专项课题和浙江省自然科学基金经费的资助，是研究得以开展的基础，在此向有关部门和领导表示感谢!十几年求知路上，无数人相助。在此，向所有关心、帮助过我的朋友致以衷心的谢意，向悉心培育过我的老师致以崇高的敬意，向历尽千辛万苦抚育我成人、供我读书的父母表示最诚挚的谢意，父母的养育之恩我终生难忘!桶金勇于杭州·浙江大学华家池2006年S月2006年浙江大学硕士学位论文摘要本课题以泌乳奶牛乳腺组织为原材料，比较几种不同收集乳腺上皮细胞的方法，从中选择一种比较合适的方法，做为后续研究的基础。在此基础上，通过体外培养研究小肽和游离氨基酸以及赖氨酸

5、和蛋氨酸比例对奶牛乳腺上皮细胞酪蛋白钒l基因表达的影响。1．乳腺上皮细胞收集方法的比较研究采用三种不同的方法(酶消化、机械分离、组织块培养)收集乳腺上皮细胞进行体外培养，三种不同的方法收集的乳腺细胞连续培养7天，从第二天开始测lVITTOD值，以此反映三种方法收集的乳腺细胞在体外培养过程中的生长增殖情况。结果表明：胶原酶消化收集的乳腺上皮细胞在随后的培养过程中活性很低，不能正常生长和增殖。通过机械分离的方法分离乳腺组织时，分离得到的单个细胞相对较少，主要以细胞团的形式分离出来，这些细胞团形式存在的细胞，在培养过程中不容易贴壁，悬浮在培养液当中，导致其在随后的培养过程中活性也

6、很低。组织块培养的方法收集的乳腺上皮细胞在培养过程能正常生长与增殖，并且出现了“拉网”、“圆顶状”等上皮细胞样结构，收集的细胞在阿rr细胞增殖试验中其OD值在培养5天后要显著高于其它两种方法收集得到的细胞(P

7、结果表明；添加蛋氨酸的浓度低于60斗g／m1时酪蛋白％I基因表达随蛋氨酸浓度的增加而增强，随后酪蛋白oat基因表达随蛋氨酸浓度的增加而减弱，添加蛋氨酸为60l*g／ml时基因表达最强，与0pg／ml组间差异显著口<0．05)，其余各组间差异均不显著；用60肛g／ml蛋氨酸二肽或120ptg／m1蛋氨酸赖氨酸二肽替代等量的游离氨基酸时，添加二肽组乳．4-2006年浙江大学硕士学位论文腺上皮细胞酪蛋白o。1基因表达要极显著高于添加游离氨基酸组(P