树突状细胞介导的猪轮状病毒黏膜免疫分子机制研究

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1、分类号：S852.65+9.4单位代码：10193密级：公开学号：20130837博士学位论文树突状细胞介导的猪轮状病毒黏膜免疫分子机制研究StudiesonthemucosalimmunemechanismmediatedbydendriticcellsstimulatedwithPorcineRotavirus学位授予单位及代码：吉林农业大学（10193）学科专业名称及代码：预防兽医学（090602）作者姓名：叶丽萍指导教师：王春凤研究方向：动物微生态学与黏膜免疫学位类别：农学博士2017年12月树突状细胞介导的猪轮状病毒黏膜免疫分子机制研究Studies

2、onthemucosalimmunemechanismmediatedbydendriticcellsstimulatedwithPorcineRotavirus作者姓名：叶丽萍指导教师：王春凤论文答辩日期：2017.12.01授予学位日期：2017.12答辩委员会主席：丁壮论文评阅人：唐丽杰孙淑红徐志文2017年12月独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文是本人在导师指导下，独立进行研究所取得的成果。尽我所知，除文中特别加以标注和致谢所列内容外，论文中不包含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得吉林农业大学或其它教育机构的学位或证书而使用

3、过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。本学位论文所有内容若有不实之处，本人愿意承担一切相关法律责任和后果。学位论文作者签名：签字日期：年月日关于学位论文使用授权的声明1、本人完全了解吉林农业大学有关保留和使用学位论文的规定，即：研究生在校攻读学位期间所完成的论文及相关成果的知识产权属吉林农业大学所有，并同意将本论文的版权授权给吉林农业大学，学校有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。2、本人（同意/不同意，务必打印后填写）吉林农业大学将本论文

4、版权授权给不同媒体进行电子出版、多媒体出版、网络出版以及其他形式出版（涉密学位论文解密后应遵守此协议）。3、本人声明毕业后若发表在攻读研究生学位期间完成的论文及相关的学术成果，必须以吉林农业大学作为第一署名单位。学位论文作者签名：签字日期：年月日指导教师签名：签字日期：年月日本研究由国家自然科学基金项目（31272541，31672528）资助。ThisworkwassupportedbytheNationalNaturalScienceFoundationofChina(31272541,31672528).摘要轮状病毒(Rotavirus，RV)感染已成为

5、全球性危害公共卫生安全的主要原因之一，RV感染机体首先入侵肠道，诱导机体免疫应答以肠道黏膜免疫为主，目前对其感染特点、免疫反应及疫苗开发做了大量的研究工作，但对其具体的黏膜免疫分子机制尚未阐明。黏膜免疫是连接固有免疫和获得性免疫的桥梁，其中树突状细胞(dendriticcells，DCs)作为重要的抗原递呈细胞起着衔接固有免疫和获得性免疫的关键免疫分子作用。本研究用猪轮状病毒(PorcineRotavirus，PRV)体外刺激小鼠骨髓源树突状细胞(Bonemarrow-deriveddendriticcells，BMDCs)和体内感染BALB/c小鼠，以DCs

6、表面的Toll样受体(Toll-likereceptors，TLRs)为靶位，研究PRV刺激对DCs成熟活化、亚群分化、细胞因子分泌及Th分化等的影响；并在此基础上通过Pepinh-TRIF阻断BMDCs的TRIF信号和感染TRIF-/-小鼠，研究PRV通过DCs诱导的黏膜免疫分子机制，为PRV疫苗开发和疾病防治奠定理论基础。PRV体外刺激GM-CSF和IL-4诱导的小鼠BMDCs，应用流式细胞术、荧光定量PCR、ELISA和Westernblotting方法检测PRV刺激对BMDCs的影响结果表明：(1)PRV刺激能促进BMDCs的活化与成熟，上调表达MHC

7、II和共刺激分子CD40、CD80和CD86，增加DCs的抗原递呈能力。(2)PRV刺激BMDCs后TLR2和TLR3(而不是TLR4和TLR8)参与PRV刺激后的免疫应答。(3)PRV刺激BMDCs活化的TLR3/TLR2可通过TRAF3或TRAF6诱导NF-κB活化和细胞因子IL-6、IL-10、IL-12、IFN-γ等的分泌。(4)PRV刺激成熟的BMDCs能显著促进T淋巴细胞增殖并促进T细胞向Th1类细胞分化。将BALB/c小鼠随机分成PBS对照组、PRV组和poly(I:C)组进行PRV攻毒试验，检测PRV刺激对小鼠脾脏和MLN中DCs成熟活化、亚群

8、分化、细胞因子分泌影响的结果表明：(1