纳米金使裸鼠结直肠癌血管减压及其分子机制

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1、暨南大学博士学位论文题名：纳米金使裸鼠结直肠癌血管减压及其分子机制Title:Themolecularmechanismsofcolorectalcancerxenograftsvasculaturedecompressioninnudemicebygoldnanoparticles作者姓名：赵晓旭指导教师姓名潘运龙及学位、职称：医学博士、教授学科、专业名称：外科学、普外临床研究及腹腔镜技术论文提交日期：2018-04-10论文答辩日期：2018-05-28答辩委员会主席：曾谷城教授论文评阅人：盲

2、审学位授予单位和日期：暨南大学2018-06-28暨南大学2018届博士学位论文纳米金使裸鼠结直肠癌血管减压及其分子机制纳米金使裸鼠结直肠癌血管减压及其分子机制中文摘要目的：在裸鼠结直肠癌移植瘤模型中，通过免疫组化及荧光标记结合酶联免疫吸附技术检测纳米金能否减压裸鼠结直肠癌异常血管并探讨其相关分子机制。在此基础上研究纳米金使结直肠癌血管减压能否进一步提高化疗药物顺铂疗效。方法：(1)细胞实验：实验分为不同浓度纳米金处理组和空白对照组，人结直肠癌细胞(sw620)常规消化种板，培养24h后各组分别加

3、入不同浓度纳米金溶液和无血清培养液，继续培养24h后：①CCK-8比色法检测纳米金对sw620细胞增殖的影响；②Westernblot结合ELISA方法检测纳米金对sw620细胞表达及分泌转化生长因子β1(transforminggrowthfactorβ1,TGF-β1)、结缔组织生长因子(connectivetissuegrowthfactor,CTGF)和血管内皮生长因子(vascularendothelial7growthfactor,VEGF)的影响。(2)动物实验：将1×10个/(0.

4、2ml•只)sw620细胞接种于Balb/c裸鼠右后肢皮下，建立荷结直肠癌裸鼠模型。然后随机分为4组，每组6只：纳米金处理组：1.0mg/kg纳米金溶液；顺铂处理组：5.0mg/kg顺铂溶液；纳米金+顺铂处理组：含纳米金1.0mg/kg、顺铂5.0mg/kg；对照组：等剂量生理盐水。各组均经裸鼠尾静脉注射0.1ml相应的溶液，2日1次，连续给药2周。在给药结束当天，收集各处理组裸鼠血液、肿瘤及各脏器标本：①测量移植瘤体积、重量及固体应力；②ELISA方法检测裸鼠血清TGF-β1、CTGF和VEGF

5、水平；③免疫组化结合荧光标记技术检测肿瘤组织TGF-β1、CTGF、VEGF、肿瘤相关成纤维细胞、肿瘤间质胶原纤维I水平和肿瘤血管形态及灌注情况；④哌莫硝唑染色法检测肿瘤缺氧区域变化；⑤高效液相色谱检测裸鼠移植瘤及肝肾组织顺铂水平。结果：细胞实验结果显示，适宜浓度纳米金对sw620细胞增殖影响无统计学差异(F=0.803，P>0.05)，但是纳米金可以抑制sw620细胞表达及分泌TGF-β1(F=23.962，P<0.001)、CTGF(F=214.624，P<0.001)和VEGF(F=214.

6、624，P<0.001)，并且与纳米金浓度呈正相关。动物实验：(1)各处理组荷瘤裸鼠血清TGF-β1的浓I暨南大学2018届博士学位论文纳米金使裸鼠结直肠癌血管减压及其分子机制度分别如下，生理盐水对照组：(1176.3162.56)pg/ml，1.0mg/kg纳米金处理组：(729.26108.34)pg/ml，与生理盐水对照组相比，纳米金处理组荷结直肠癌Balb/c裸鼠血清TGF-β1的浓度明显降低，差别具有统计学意义(t=8.753，P<0.001)。此外，纳米金对荷瘤裸鼠血清CTGF和V

7、EGF的影响与上述结果类似。(2)各处理组裸鼠结直肠癌移植瘤TGF-β1的阳性区域面积分别如下，生理盐水对照组：(14.633.01)%，1.0mg/kg纳米金处理组：(3.170.76)%，与生理盐水对照组相比，纳米金处理组结直肠癌移植瘤TGF-β1阳性区域面积明显减少，差别具有统计学意义(t=9.034，P<0.001)。此外，纳米金对裸鼠结直肠癌移植瘤CTGF和VEGF的影响与上述结果类似。(3)各处理组荷结直肠癌Balb/c裸鼠移植瘤固体应力分别如下，生理盐水对照组：0.570.03

8、，1.0mg/kg纳米金处理组：0.440.01，与生理盐水对照组相比，纳米金处理组荷结直肠癌Balb/c裸鼠移植瘤固体应力明显减小，差别具有统计学意义(P<0.01)。(4)各处理组荷结直肠癌Balb/c裸鼠移植瘤肿瘤相关成纤维细胞水平分别如下，生理盐水对照组：(3.931.90)%，1.0mg/kg纳米金处理组：(0.910.24)%，P<0.01。(5)各处理组裸鼠移植瘤间质胶原纤维I水平：生理盐水对照组：(42.165.14)%，1.0mg/kg纳米金处理组：(11