GOT2在卵巢癌中的作用及其机制研究

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1、暨南大学硕士学位论文GOT2在卵巢癌中的作用及其机制研究TheRoleandMechanismofGOT2inOvarianCancer作者姓名：樊晶指导教师姓名徐萌及学位、职称：博士、教授、主任医师、博士生导师学科、专业名称：肿瘤学学位类型：专业学位论文提交日期：2018年4月论文答辩日期：2018年5月答辩委员会主席：向军俭论文评阅人：1暨南大学硕士学位论文2暨南大学硕士学位论文摘要目的：探讨谷草转氨酶(glutamic-oxaloacetictransaminase2,GOT2)在卵巢癌发生发展

2、中的作用，并阐述其机制可能与GOT2通过PI3K/Akt/mTOR信号通路干扰细胞营养代谢诱导细胞发生异常自噬相关。方法：选择人卵巢癌c13*细胞系作为实验模型。采用慢病毒包装病毒系统建立稳定敲除的GOT2和AKT细胞系，计数法和CCK8法检测谷草转氨酶GOT2敲除后体外对卵巢癌细胞c13*增殖活性的影响；显微镜下观察c13*细胞敲除GOT2后形态学变化；共聚焦显微镜下观察敲除GOT2后感染GFP-LC3时绿色荧光的分布；免疫印迹法检测p-AKT、AKT、p-mTOR、mTOR、p62、LC3的蛋白水

3、平。结果：(1)谷草转氨酶GOT2敲除后体外对c13*细胞的增殖具有明显抑制作用，且细胞形态学表现为细胞变大。(2)c13*细胞在谷草转氨酶GOT2敲除后发生了细胞自噬形态学变化。(3)p-AKT、p-mTOR、LC3Ⅰ、p62逐渐减弱，LC3Ⅱ蛋白的表达逐渐上升。结论：谷草转氨酶GOT2敲除后在体外对卵巢癌细胞c13*具有明显的抑制作用，细胞内出现明显的自噬形态学变化，其作用机制可能与敲除GOT2后通过抑制信号通路PI3K/Akt/mTOR的活性干扰细胞内营养能量代谢诱导细胞产生异常的自噬活动有关。

4、关键词：谷草转氨酶；卵巢癌；p-AKT；p-mTOR；自噬3暨南大学硕士学位论文AbstractObjective:Theroleofglutamic-oxaloacetictransaminase2(GOT2)inovariancanceranditspossiblemechanism.Methods:Humanovariancancerc13*celllinewasselectedasanexperimentalmodel.ThestableknockoutGOT2andAKTcelllinesw

5、ereestablishedusingthelentiviralpackagingvirussystem.TheeffectsofGOT2knockoutontheproliferationofovariancancercellsc13*invitroweredeterminedbycountingandCCK8assay;ThecellmorphologicalchangesobservedunderthemicroscopeafterGOT2knockout.Theautophagicmorpho

6、logicalchangeswereobservedafterGOT2infectedwithlentivirus;ThedistributionofgreenfluorescencewasobservedbyconfocalmicroscopeaftertransfectionwithGFP-LC3;Theproteinlevelsofp-AKT,AKT,p-mTOR,mTOR,p62,andLC3weredetectedbyWesternblotting.Results:(1)Itobviousi

7、nhibitestheproliferationofc13*cellsinvitroafterGOT2knockout.(2)Morphologicalchangesofautophagyoccurredinc13*cellsafterGOT2knockout.(3)Theexpressionofp-AKT,p-mTOR,p62andLC3Iwasdecreased,andtheexpressionofLC3IIwasgraduallyincreased.ConclusionTheGOT2knock-

8、outhasasignificantinhibitoryeffectonovariancancercellc13*invitro.ItspotentialmechanismmayberelatedtotheinterferenceofnutritionalandenergymetabolismbyinhibitingthesignalingpathwayofPI3K/Akt/mTORafterknock-outGOT2.Keywords:Aspartat