重组人干扰素β1a诱导人骨髓间充质干细胞成软骨定向分化的研究

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1、硕士学位论文重组人干扰素β1a诱导人骨髓间充质干细胞成软骨定向分化的研究作者姓名李乔乔学科专业发酵工程指导教师吴振强教授所在学院生物科学与工程学院论文提交日期2018年4月ChondrogenicdifferentiationofHumanBoneMarrowMesenchymalStemcellsinducedbyRecombinantHumanInterferonβ1aADissertationSubmittedfortheDegreeofMasterCandidate：LiQiaoqiaoSupervisor：Prof.WuZhenqiangSouthChinaUniversityof

2、TechnologyGuangzhou,China分类号：Q813.1+1学校代号：10561学号：201520133869华南理工大学硕士学位论文重组人干扰素β1a诱导人骨髓间充质干细胞成软骨定向分化的研究作者姓名：李乔乔指导教师姓名、职称：吴振强教授申请学位级别：工学硕士学科专业名称：发酵工程研究方向：细胞培养论文提交日期：2018年4月28日论文答辩日期：2018年06月01日学位授予单位：华南理工大学学位授予日期：年月日答辩委员会成员：主席：潘力委员：杨博、罗立新、郑穗平、张毅华南理工大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是本人在导师的指导下独立进行研宄所取得的

3、研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写的成果作品。对本文的研宄做出重要贡。本人完全意献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明识到本声明的法律后果由本人承担。：日作者签名：日期勿迖年＜月ｙ学位论文版权使用授权书艮本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，Ｐ：研究生在校攻读学位期间论文工作的知识产权单位属华南理工大学。学校有权保存并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许学位论文被查阅（除在保密期内的保密论文外）；学校可以公布学位论文的全、、汇编学位部或部分内容，可以允许采用

4、影印缩印或其它复制手段保存一致论文。本人电子文档的内容和纸质论文的内容相。本学位论文属于：□保密），（校保密委员会审定为涉密学位时间：年月曰于年月日解密后适用本授权书。＿＿保密，同意在校园网上发布，供校内师生和与学校有共享协议的单位浏览；同意将本人学位论文提交中国学术期刊（光盘版）电子杂志社全文出版和编入ＣＮＫＩ《中国知识资源总库》，传播学位论文的全部或部分内容。“十相应方框内打（请在以上）义私曰：期作者签名Ｄ＾曰：期对指导教师签名摘要骨髓间充质干细胞具有自我增殖能力和多向分化潜能，在特定条件下可分化为软骨细胞，移植后能更好地与软骨板融合，是

5、软骨组织工程的理想细胞。本人所在实验室长期从事重组人干扰素β的研究、制备工作以及组织工程领域的研究工作，研究中首次将重组人干扰素β（RecombinantHumanFibroblastInterferon-β，rhIFN-β）作为细胞因子用于干细胞分化过程，发现重组人干扰素β能明显促进人骨髓间充质干细胞（humanbonemesenchymalstemcells，hMSCs)分化成软骨细胞，但其作用机制尚不清楚。本文的目的是研究成球培养时重组人干扰素β1a对hMSCs成软骨细胞定向分化的影响，转录组测序分析IFN-β1a诱导的hMSCs成软骨分化的相关信号通路并进一步进行验证分析，为将重组人

6、干扰素β1a这一老药新用于软骨组织工程奠定理论基础。(1)本文首先采用成球诱导法研究了在含有10ng/mLTGF-β3的诱导分化培养基中添加不同浓度重组人干扰素β1a对hMSCs成软骨分化的影响。结果表明在含有10ng/mLTGF-β3的诱导分化培养基础添加100ng/mLIFN-β1a组GAG含量显著高于其他组（P<0.05），能明显促进软骨球形成，阿利新蓝染色结果也表明TGF-β3+100ng/mLIFN-β1a组染色之后，蓝色所占比例增多，Sox9和CollagenII在mRNA和蛋白表达水平均显著增高，且随着诱导时间的延长呈上升趋势。上述结果表明在含有10ng/mLTGF-β3的诱导

7、分化培养基中加入100ng/mLIFN-β1a能够更有效地促进hMSCs成软骨分化。(2)基于转录组测序分析IFN-β1a诱导的hMSCs成软骨细胞分化的相关作用机制。在TGF-β3诱导分化培养基础添加100ng/mLIFN-β1a（IFN-β1a组）对hMSCs诱导分化21天，同时以含有TGF-β3的普通诱导分化培养基为对照组。收集软骨球，提取RNA，测序分析差异表达基因和信号通路。结果表明与对照组相比，I