食管癌相关新miRNA的鉴定与功能的初步研究

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1、学校代码：10286分类号：R12密级：公开UDC：614学号：152906食管癌相关新miRNA的鉴定与功能的初步研究研究生姓名：刘梦歆导师姓名：刘冉教授申请学位类别医学硕士学位授予单位东南大学一级学科名称公共卫生与预防医学论文答辩日期2018年5月31日二级学科名称劳动卫生与环境卫生学学位授予日期2018年6月20日答辩委员会主席浦跃朴教授评阅人梁戈玉教授刘起展教授2018年6月20日硕士学位论文食管癌相关新miRNA的鉴定与功能的初步研究专业名称：劳动卫生与环境卫生学研究生姓名：刘梦歆导师姓名

2、：刘冉教授IDENTIFICATIONANDPRELIMINARYSTUDYOFTHEFUNCTIONOFNOVELMIRNAASSOCIATEDWITHESOPHAGEALCANCERAThesisSubmittedtoSoutheastUniversityBYLIUMeng-xinSupervisedbyProf.LIURanSchoolofPublicHealthSoutheastUniversityJune2018东南大学学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行

3、的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得东南大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：舍）辨之曰期：德“东南大学学位论文使用授权声明东南大学、中国科学技术信息研究所、国家图书馆、《中国学术期刊（光盘版）》电子杂志社有限公司、万方数据电子出版社、北京万方数据股份有限公司有权保留本人所送

4、交学位论文的复印件和电子文档，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。本人电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。除在保密期内的保密论文外，允许论文被查阅和借阅，可以公布（包括以电子信息形式刊登论文的全部内容或中、英文摘要等部分内容。论文的公布包）（括以电子信息形式刊登）授权东南大学研究生院办理。％研究生签名：导师签名：中文摘要食管癌相关新miRNA的鉴定与功能的初步研究硕士研究生：刘梦歆导师：刘冉教授东南大学公共卫生学院中文摘要一、研究背景与目的研究发现miRNA的表达

5、异常与多种肿瘤的发生、发展相关，miRNA可能成为肿瘤诊断和预后判断的生物标志物。本研究基于前期Solexa高通量测序及miRDeep2软件预测的结果，对候选新miRNA进行了二级结构预测及实验验证，评估候选新miRNA与食管癌的发病风险，进一步评价它们的生物学功能，初步探讨可能的调控机制，为寻找潜在的肿瘤标志物及其临床应用提供基础数据支持。二、研究方法与结果(一)食管癌相关候选新miRNA的鉴定及与食管癌的发病风险研究基于前期对食管癌细胞RNA的Solexa高通量测序和miRDeep2软件预测的结

6、果，选择了miRDeep2软件评分最高的4个候选新miRNA，使用sflod在线预测网站分析候选新miRNA前体序列的二级结构，结果显示4个候选新miRNA的前体序列都能以较低的自由能形成茎环结构，且成熟体序列分别位于茎环的3’及5’臂上。使用荧光定量PCR检测候选新miRNA在食管癌细胞及食管上皮细胞中的表达情况，结果显示novel-miR-4885、novel-miR-13894、novel-miR-21009均能在食管癌细胞及食管上皮细胞中稳定表达，novel-miR-7121仅在食管癌细胞中

7、表达，扩增曲线平行性较好，熔解曲线峰形单一。对荧光定量PCR产物进行TA克隆测序，结果显示测序峰图波形单一，无杂峰，4个候选新miRNA的荧光定量PCR产物均与生物信息学预测的miRNA成熟体序列完全一致。招募淮安市第一人民医院2009~2012年经病理或内镜诊断明确的食管癌患者126例。使用荧光定量PCR检测候选新miRNA在食管癌及癌旁组织中的表达情况，结果显示，与癌旁组织相比，novel-miR-4885、novel-miR-7121、novel-miR-21009在食管癌组织中显著高表达(P

8、<0.05)，相对表达量分别是对照组的1.77、1.38、1.91倍；而novel-miR-13894在食管癌组织和癌旁组织中的表达无统计学差异(P>0.05)。对数据进行条件logistic回归分析，结果显示，novel-miR-4885、novel-miR-7121、novel-miR-21009表达的升高能显著增加食管癌的发病风险(P<0.05)，而novel-miR-13894表达的升高不影响食管癌的发病风险(P>0.05)。I中文摘要(二)候选新miRNA的