大鼠腹膜纤维化相关miRNA的初步筛选与验证

《大鼠腹膜纤维化相关miRNA的初步筛选与验证》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、答辩委员会主席：麦韭玉熬援【浙江太堂匡堂瞳附属箍二医瞳】论文答辩日期：2Q13』5』2鱼温州医学院硕士学位论文目录缩略词表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯2中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯4英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯6前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯8日U舌⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯8材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯10结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯20讨论

2、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯27结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯29以后的研究方向⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯30参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯3l附录一简历⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯33致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯34综述及参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯35发表的临床论文⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯42独创性声明⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯48温

3、州医学院硕士学位论文全文缩略词表2温州医学院硕士学位论文3温州医学院硕士学位论文大鼠腹膜纤维化相关microRNA的初步筛选与验证目的：初步探索microRNA(miRNA，miR)是否参与腹膜透析相关腹膜纤维化。方法：将sD雄性大鼠24只(体重150-J：109)随机平均分为3组：(i)正常对照组；(ii)生理盐水组：每日腹腔注射0．9％生理盐水20ml；(iii)高糖组：每目腹腔内注射4．25％含葡萄糖腹膜透析液20ml。4周后，进行2h腹膜平衡试验(PET)，检测大鼠腹膜功能，处死大鼠，取大鼠

4、腹膜组织，行光镜检查(HE、Masson染色)，免疫组化(SP法)检测Q平滑肌肌动蛋白(Q—SMA)和胶原I(C01．I)的蛋白表达，RT-qPCR检测Q—SMA和C01．I的mRNA表达，基因芯片分析检测各组miRNA。选取芯片分析显著差异表达的miRNA，进行RT-qPCR验证。结果：与空白对照组比较或与生理盐水组比较，高糖组大鼠的透出液葡萄糖浓度／初始腹透液葡萄糖浓度(D2／Do)和超滤量均明显减少，透出液尿素氮浓度厂血浆尿素氮浓度(D／P。。。)明显增3H(P值均

5、白对照组的组问比较，D2／Do、超滤量及D／P。啪的差异均无统计学意义(P值均>0．05)。高糖组大鼠腹膜间皮下基质增厚、血管增生及炎症细胞浸润明显增加。与空白对照组比较或与生理盐水组比较，高糖组大鼠腹膜组织Q．SMA和C01．I的蛋白及mRNA的表达量均显著升高(尸0．05)基因芯片分析提示：(1)与空白对照组比较或与生理盐水组比较，miR．31、miR一93、miR-

6、100、miR。152和miR一497在高糖组大鼠腹膜组织中均呈显著性低表达，miR-122在高糖组大鼠腹膜组织中呈显著性高表达；(2)与空白对照组比较，miR-192、miR-194、miR．200b、miR．138和miR．146a等miRNAs也在高糖组大鼠腹膜组织中均呈显著性低表达；(3)与生理盐水组比较，miR一199a．5p、miR-200e、miR-24．2、miR．27b、miR．30b一5p等miRNAs也在高糖组大鼠腹膜组织中均呈显著性低表达；(4)与空白对照组比较，miR．19

7、2、miR．194和miR．200b在生理盐水组大鼠腹膜组织中也呈显著性低表达。选取芯片分析显著差异表达的9条miRNAs(miR．31、miR．93、miR一100、miR一152、miR．497、miR．122、miR一192、miR-194和miR-200b)，进行RT-qPCR验证。结果显示：与空白对照组比较或与生理盐水组比较，miR-31、miR．93、温州医学院硕士学位论文miR．100、miR-152、miR．497、miR-192、miR．194和miR一200b等8条miRNAs在

8、高糖组大鼠腹膜组织中的表达均呈显著性低表达(P值均<0．05)，miR-122在高糖组大鼠腹膜组织中呈显著性高表达(P<0．05)；生理盐水组与空白对照组的组间比较，上述9条miRNAs在大鼠腹膜组织中的表达均无显著差异(P值均>O．05)。结论：(1)4．25％葡萄糖腹膜透析液，连续腹腔注射28天，可以建立大鼠PF模型。(2)miR．31、miR．93、miR．100、miR-152、miR-497、miR一122、miR-192、miR-194和miR一200b等