食管鳞癌放射敏感性相关mirna的筛选及验证

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1、目录食管鳞癌放射敏感性相关miRNA的筛选及验证⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯11．1中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯11．2英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯31．4食管鳞癌放射敏感性相关miRNA的筛选⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯91．4．1材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯91．4．2结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯171．5miR一203与食管鳞癌TE一1细胞放射敏感性的相关研究⋯⋯⋯⋯221．5．1材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯221．5．2结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯3

2、41．6全文讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯381．7全文小结⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯431．8参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯441．9中英文对照⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯5l23致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·⋯⋯·⋯⋯⋯⋯52微小RNA与食管癌放射敏感性的相关研究(综述)⋯⋯⋯⋯⋯53泸州医学院硕士学位论文食管鳞癌放射敏感性相关miRNA的筛选及验证摘要lIlllllqIlllUqIllllqIIllIlllIilIIlllY2602289研究背景与目的：食管癌的治疗主要是手术治疗、放疗、化疗，但

3、由于其早期症状隐匿，就诊时绝大部分的食管癌患者已属于中晚期失去了手术时机，故放射治疗成为了食管癌主要及其有效治疗手段之一。不同食管癌个体之间其放疗敏感性存在差异，由此导致了放疗疗效的差异，因此预测食管癌放射敏感性具有重要的意义。研究显示不同放射敏感性的食管癌细胞具有差异的miRNA表达谱，那不同放射敏感性食管癌组织是否也具有差异表达的miRNA，机制又如何。有研究显示Bmi．1高表达与食管癌放射抵抗密切相关，生物信息软件分析示Bmi．1是miR-203的靶基因之一。本实验旨在研究不同放射敏感性的食管鳞癌病人miRNA的表达差异及miR-203是否能通过下调Bmi．1的表达来增加食管鳞癌TE．1

4、细胞的放射敏感性。方法：1．根据RECIST指南(1．1版本)标准将6例通过同步放化疗的食管鳞癌病人分为敏感组和不敏感组，收集治疗前组织标本并进行配对。应用miRNA芯片检测两组标本miRNA的表达差异，预测其可能的靶基因，选取其中的miR-374c一5p进行食管癌细胞株TE．1的转染，qPCR检测其预测的靶基因CD47，CYFIP2的表达情况。2．结合文献及芯片结果选取miR-203和其靶基因Bmi．1为进一步实验对象，采用LipofectamineTM2000脂质体瞬时转染miR-203模拟物(miR．203mimic)及阴性对照转染序列(miR．203NC)进入食管鳞癌TE．1细胞中，m

5、iRNA．203mimics和miRNA．203NC浓度均为50nmol／L，实验共设31泸州医学院硕士学位论文组，即miRNA．203mimic转染组、miR-203NC转染组、空白对照组。Westernblot检测Bmi．1蛋白的表达情况，单克隆实验检测TE．1细胞的增殖情况。结果：1．与放射不敏感组比较，放射敏感组中有2个miRNA表达上调超过1．5倍，为miR-1272，miR-5571—5p；有8个miRNA表达下调超过1．5倍，为miR·125b-1-3p，miR-5002—3p，miR-374c一5p，miR-3680-5p，miR-3908，miR-4292，miR-1915—

6、3p，miR-4516。研究显示其中miR-125b-1-3p与多种肿瘤发生、发展及其放化疗敏感性密切相关。2．miR-374c一5p预测的靶基因为CYFIP2，DDIT4，CD47，PTTGl，TNFRSF25，cyclinE2等，这些靶基因与肿瘤凋亡、发生、发展及其预后密切相关。3．qPCR结果显示，与阴性对照组相比，转染组CD47和CYFIP2的表达未见明显降低，差异无统计学意义(P)0．1)。4．Westernblot结果显示，与阴性对照及空白对照组分别比较，转染组中Bmi．1明显降低，差异具有统计学意义(P<0．001)；阴性对照组与空白组比较，Bmi．1有所降低，但差异无统计学意义

7、(P)O．01)。5．克隆形成实验表明过表达miR-203可增加食管癌细胞TE．1放射敏感性。转染组，阴性对照组，空白组的DO依次为1．498、1．6295、1．7，Dq依次为1．3335、1．8578、1．9715，、SF2依次为0．6065、O．73668、O．74595，O／B依次为3．8165、1．0270、1．1409。转染组中DO、Dq、SF2均有所降低，a／13有所升高，差异均具有统