NRP2在乳腺癌中的作用及与Wnt_β-catenin信号通路相关性研究

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1、学校代码：１０２８５学号：２０１４４２２１０７８系Ｗ、鲁＿ＳＯＯＣＨＯＷＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ｜／－ｃａＮＲＰ２在乳腺癌中的作用及与Ｗｎｔｔｅｎｉｎ信号ｐ通路相关性研究ｒｃｈｏｎｈｅｒｏｒｅｒａｎｄｉｔｓｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｗｉｔｈＲｅｓｅａｔｌｅｏｆＮＲＰ２ｉｎｂａｓｔｃａｎｃｅｃ－Ｗｎｔ／ｃａｔｅｎｉｎｓｉｎａｌｉｎａｔｈｗａｐｇｇｐｙ研究生姓名黄筛指导教师姓名郭玲玲免疫学专业名称｜Ｌ研究方向月中瘤病理学所在院部医学部基础医学与生物科学学院ＢＨ论文提交

2、日期２０１７年４月■NRP2在乳腺癌中的作用及与Wnt/β-catenin信号通路相关性研究中文摘要NRP2在乳腺癌中的作用及与Wnt/β-catenin信号通路相关性研究中文摘要【目的】分析NRP2在乳腺癌（BC）组织中的表达及其与临床病理特征的相关性，探讨NRP2基因在BC恶性演进过程中的生物学功能及其分子机制，为BC的临床诊断与治疗提供新的生物标志物和分子靶点。【方法】第一部分：1、运用qRT-PCR技术和IHC染色技术检测NRP2在BC组织与癌旁组织中的差异性表达。2、统计分析BC组织中NRP2与BC临床病理特征的相关性。第二部分：1、运用qRT

3、-PCR技术和Westernblot技术检测NRP2在五种不同BC细胞株中的差异性表达，筛选出表达水平最高的BC细胞株作为研究对象。2、构建NRP2小分子干扰RNA（siRNA）瞬时转染BC细胞，运用qRT-PCR技术和Westernblot技术检测其对NRP2表达的抑制率。3、MTT实验和平板克隆形成实验检测BC细胞中抑制NRP2的表达后细胞增殖活性的改变。4、流式细胞仪检测BC细胞中抑制NRP2的表达后细胞凋亡速率的改变。5、划痕实验和Transwell实验检测BC细胞中抑制NRP2的表达后细胞侵袭和转移能力的改变。第三部分：1、运用qRT-PCR技术和West

4、ernblot技术检测低表达NRP2的BC细胞中Wnt/β-catenin信号通路关键信号分子β-catenin的表达变化。2、运用IHC染色技术检测β-catenin在BC组织与癌旁组织中的差异性表达，统计分析BC组织中NRP2与β-catenin表达的相关性。3、运用qRT-PCR技术和Westernblot技术检测低表达NRP2的BC细胞中β-catenin下游效应分子CyclinD1、c-myc、MMP2、vimentin、E-Cadherin的表达变化。4、IHC染色检测β-catenin下游各效应分子在BC组织中的表达水平，统计分析NRP2与各效应分子表

5、达之间的相关性。I中文摘要NRP2在乳腺癌中的作用及与Wnt/β-catenin信号通路相关性研究【结果】第一部分：1、NRP2在BC组织与癌旁组织中的表达具有显著差异，与癌旁组织相比，BC组织中NRP2的表达水平显著增高。2、BC组织中高表达的NRP2与患者淋巴结转移、TNM分期相关（p<0.05），而与患者年龄、肿瘤直径、分级、ER、PR、HER-2的表达之间无明显相关性（p>0.05）。第二部分：1、NRP2在五种BC细胞株中均有不同程度的表达，且在转移潜能最高的MDA-MB-231细胞中表达最高。2、MDA-MB-231细胞中转染NRP2siRNA后，NRP

6、2的表达显著受到抑制。3、MDA-MB-231细胞中抑制NRP2的表达后细胞增殖活性降低。4、MDA-MB-231细胞中抑制NRP2的表达后细胞的凋亡速率无明显改变。5、划痕实验结果显示，MDA-MB-231细胞中抑制NRP2的表达后细胞的迁移能力降低，划痕愈合速度变慢。Transwell实验结果显示，MDA-MB-231细胞中抑制NRP2的表达后细胞的穿膜数量减少，细胞的侵袭和转移能力受到抑制。第三部分：1、MDA-MB-231细胞中抑制NRP2的表达后Wnt/β-catenin信号通路关键信号分子β-catenin的表达也随之降低。2、71.698%的BC组织呈

7、现β-catenin高表达，且BC组织中NRP2与β-catenin的表达具有相关性（p<0.05）。3、抑制NRP2的表达后β-catenin下游效应分子c-myc、MMP2表达显著降低，E-Cadherin表达显著升高，CyclinD1表达降低但无显著性差异，而vimentin表达无明显变化。4、BC组织中c-myc、MMP2、E-Cadherin与NRP2的表达具有相关性（p<0.05）。【结论】1、NRP2在BC组织中特异性高表达，且与淋巴结转移、TNM分期相关。2、siRNA靶向干扰NRP2后BC细胞的增殖、侵袭和转移能力降低。3、BC组织中NRP2与