特异核基质蛋白在人食管癌EC9706细胞凋亡中作用的初步研究

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1、摘要本论文以姜黄素(curc眦妇，Cur)处理人食管癌EC9706细胞，在鉴定姜黄素对入食管癌EC9706细胞凋亡诱导效果的基础上，综合应用亚细胞蛋白质组学分析、免疫细胞化学、细胞分子生物学等技术，对EC9706细胞凋亡过程中核基质蛋白的变化进行了较为系统的研究。分析鉴定和确证与EC9706细胞凋亡相关的特异核基质蛋白，并研究特异核基质蛋白与人食管癌EC9706细胞凋亡相关基因在细胞内的共定位关系与变化，探索它们在人食管癌细胞凋亡诱导过程中的调控作用，以期能够在较为整体水平上进一步认识人食管癌细胞癌变与凋亡机理问题，从而找出

2、入食管癌细胞凋亡相关的靶向性蛋白和深入探索的研究方向。实验结果表明，经30弘掇。班，姜黄素处理之后，EC9706细胞增殪受到瞻显抑制，细胞生长抑制率达83．88％，细胞发生‰／Gl期阻滞。光镜观察结果显示，经姜黄素诱导处理质的EC9706细胞出现了细胞体积缩小、核质比例减小、细胞核固缩、核内染色质凝聚等显著的细胞凋亡特征。琼脂糖凝胶电泳显示EC9706细胞出现凋亡典型的DNA梯状条带。琢)eehst染色显示细胞核内出现浓染致密的固缩形态或颗粒状荧光。免疫细胞化学检测结果显示，经姜黄素处理后，茧℃9706细胞内的抑凋亡基因撼2

3、表达下调，促凋亡基因6戤、西又．舞嚣等表达上调。双向凝胶电泳与质谱分析共鉴定12种蛋白，其中在凋亡的EC9706细胞中表达上调的有：飘越Scfi曩io鼗el∞gatlo珏螽重c勃漩A(S11)．1ib4(代嚣A王4)、CCT8prI毗e．m、Tara等3种核基质蛋白；表达下调的有：Protlibi血、SpindliI熘．2B、N擞leo曲os池、铂飘s觇∞越妇畦强蠡lc髓e臻-2Bs曲雌itb呶等9种核基质蛋自。并进一步通过蛋白免疫印迹确证了Nucleophosm_hl、Prollibi血、HSP70、S曲心li珏g．2B、

4、vi越e躐i毪等核基质蛋白的变化。激光共聚焦显微镜观察显示特异核基质蛋白NucleophosmiIl、Pr0IlibitiIl、HSP70、Spirmling．2B等与抑凋亡基因参小2和健凋亡基因鑫瓣表达产物在缁胞内均存在一定的共定位关系，并且它们的表达水平和细胞定位在细胞凋亡诱导前后均发生了改变。研究结果表爨，30沁【lo影毛姜黄素对入食管癌EC9706细胞凋亡具有显著诱导作用，并上调促凋亡基因6蕊、声3、如的表达和下调抑凋亡基因6吐2的表达。特异核基质缀自在人食管癌EC9706细胞凋亡中作用的初步研究在EC9706细胞凋

5、亡过程中，其核基质蛋白缀成产生了K：EA¨、CC稻protein、b豫等3种蛋白表达上调和P蚤ohibi娃n、Spindling．2B、Nucleop№sm遍等9种蛋白表达下调的明显变化。其中，差异表达核基质蛋白Nucleophosmill、Prombitin、HSP70、Sp磁li盼2B与EC9706细胞中Bel乏和B曩x蛋自均存在共定位关系，并在细胞凋亡过程中出现移位和分布的改变。由此证实了与人食管癌细胞凋亡相关的特异核基质蛋自的存在和特异核基矮蛋自在瓣瘟细胞凋亡中的重要侔用。研究结果表明姜黄素对人食管癌EC9706细胞

6、凋亡的诱导与其改变食管癌细胞核基质蛋白的表达，从而调控细胞凋亡相关基因活性，诱导细胞凋亡其有重要的关系。这为在较为整体的水平上深入研究肿瘤细胞凋亡诱导的调控机制以及阐明细胞癌变与凋亡机理提供了科学依据和深入探索研究的新方向，并为食管癌的防治和进一步研究提供新的靶向性蛋白。关键词：姜黄素；人食管癌EC9706细胞；细胞凋亡；核基质蛋白2ABSTRACThtllisstudy，30

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