smo sirna对人食管癌ec9706细胞增殖及凋亡影响的研究

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1、AthesissubmittedtoZhengzhouUniversityforthedegreeofMasterInfluenceofSmosiRNAonproliferation，apoptosisofhumanEsophagea‘Carcinom；CellLineEC9706EsophagealCarcmomatdellneByYanzhiDingSupervisor：Prof．HongxinZhang，KuishengChenPathologyandPathophysiologyBasical

2、MedicSchoolMay2012原创性声明／llrIIlflffiIIIJlIIIfffHllJfIJlllllllllfflllrIllllY2102712本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。学位论文作者：日期：年月日学位论文使用授权声明本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作

3、品，知识产权归属郑州大学。根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权郑州大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为郑州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。学位论文作者：日期：年月日，———一摘要SmosiRNA对人食管癌EC9706细胞增殖及凋亡影响的研

4、究．硕士研究生：导师：丁胭脂张红新教授陈奎生教授郑州大学基础医学院病理学教研室河南省肿瘤病理重点实验室河南郑州450052摘要食管癌是常见恶性肿瘤之一，严重危害人类的健康和生命。目前食管癌的发病率位于世界恶性肿瘤的第六位，位于中国恶性肿瘤的第四位。在河南省林州市，食管癌的发病率和死亡率位居首位。食管癌手术后易复发，5年生存率低。所以，为寻找食管癌新的有效的治疗方法，siRNA干扰成为最近几年基因治疗研究的热点。Hedgehog(Hh)信号通路是一个高度保守的信号通路，它不仅在人类胚胎发育、器官形成和组

5、织分化中发挥着重要的，而且在组织修复中也发挥着重要的作用。已证实食管癌、肺小细胞癌、基底细胞癌、膀胱癌、胰腺癌、前列腺癌、乳腺癌、胃癌、结肠癌、卵巢癌、肝细胞癌等肿瘤的发生发展与Hh信号通路的异常激活有关。Smoothened(Smo)蛋白是Hh信号通路的膜蛋白，Smo基因过表达在胃癌、基底细胞癌、结肠癌等肿瘤的发生发展中发挥着重要作用。Smo基因异常表达与食管癌关系的研究未曾见报道，本课题组成员已从组织学层面对Smo基因与食管鳞癌关系，研究结果表明：Smo蛋白和SmomRNA及其下游转录因子Glil

6、蛋白和GlilmRNA在食管鳞癌组织中均高表达，并均显著高于癌旁组织和正常食管黏膜组织，均与食管鳞癌发生、浸润、转移有关；Smo与Glil表达呈正相关关系，表明Smo异常表达可通过调节Glil表达促进食管癌的发生发展。材料和方法1．人食管鳞癌EC9706细胞在5％C02、温度为37"12的培养箱中培养，在LipofectaminerM2000介导SmosiRNA转染EC9706细胞。2．运用免疫细胞化学法和WesternBlot技术检测各组细胞中Smo和Glil蛋白的表达。3．采用细胞原位杂交技术和R

7、T-PCR技术检测各组细胞中Smo和GlilmRNA的表达。4．采用MTT法检测各组细胞生长抑制率。5．运用流式细胞仪和TUNEL检测各组细胞凋亡变化情况。6．统计学处理：使用SPSSl7．0进行统计分析，检验水准a=0．05。结果1．筛选SmosiRNA转染浓度：使用33nM、66nM、99nM三个浓度的FAM．siRNA转染人的食管癌EC9706细胞，转染24h后，在荧光显微镜下观察，99riM浓度组的转染效率最高，后续实验均采用此浓度。2．筛选SmosiRNA特异性最佳片段：细胞对照组、无关序列

8、组和转染试剂组都对食管癌EC9706细胞Smo和GlilmRNA表达无影响，且两两之间差异无统计学意义(P>0．05)。三条化学合成的SmosiRNA(SmosiRNA-1、SmosiRNA-2、SmosiRNA．3)转染食管癌EC9706细胞，Smo和GlilmRNA表达水平都明显低于各对照(P