Vinpocetine对新生大鼠海马CA3区锥体神经元全细胞离子通道电流影响的膜片钳研究

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1、天津医科大学硕士学位论文中文摘要【目的】细胞膜离子通道的活动特性与神经元的功能变化直接相关。本论文研究了生物碱类药物Vinpocetine对新生大鼠海马CA3区锥体神经元全细胞电流、全细胞钾电流、瞬时外向钾电流和全细胞钙电流特性的影响，为V'mpocetine的神经保护作用提供在离子通道水平上的实验支持。【方法】研究对象是应用酶消化和机械吹打方法相结合，急性分离的新生大鼠海马CA3区锥体神经元。应用膜片钳技术记录海马CA3区锥体神经元在不加药情况下和Vinpocetine作用下的全细胞跨膜总电流、全细胞外向钾电流、瞬时外向钾电流和全细胞钙电流及其变化。应用软件Clampfit9．0和Igor

2、5．01对瞬时外向钾电流和全细胞钙电流进行动力学特性分析。【结果】急性分离得到的新生大鼠海马CA3区单个锥体神经元胞体清晰、轴突明显、表面光洁、立体感强、贴壁状态良好。对Vinpocetine作用下和不加药时细胞膜离子通道特性的研究结果如下：1’．不加药时，全细胞跨膜总电流中既有内向电流成分又有外向电流成分，内向电流表现出快速激活快速失活的特性，外向电流则表现为快速激活缓慢衰减的特性。加入Vinpocetine后，全细胞电流表现为：开始时电流降低速度较快，5min后作用基本上达到稳定。Vinpocetine对全细胞电流作用呈浓度依赖性和时间依赖性，作用时间越长，抑制作用越强，药物浓度越大，抑

3、制作用越强。2．未加药时，全细胞钾电流特征典型，在．30mV左右被激活，随着激活电压升高，激活电流不断增大。加入Vinpocetine后，全细胞钾电流对Vinpocetine的浓度依赖效应不明显，但高浓度的Vinpocetine对全细胞钾电流具有很强的抑制作用。501．tmol／LVinpocetine将全细胞钾电流减小了74％，而没加Vinpocetine时的全细胞钾电流减小率仅为32．1％。天津医科大学硕士学位论文3．未加药时，全细胞瞬时外向钾电流具有快速激活、快速失活的特性，激活电压在．20mV左右。Vinpocetine对瞬时外向钾电流有增强的作用，且具有浓度依赖性，浓度越大，瞬时外

4、向钾电流越大。瞬时外向钾电流的失活动力学曲线在Vinpocetine作用下左移。4．未加药时，全细胞钙电流在．40mV左右被激活，在0mV处达到电流最大值，具有缓慢失活的特性。Vinpocetine对全细胞钙电流具有减弱作用，且具有时间依赖性，在加药5rain后减弱作用趋于稳定：全细胞钙电流抑制作用具有浓度依赖性；全细胞最大激活钙电流在加药后仍出现在0mV激活电压处；全细胞钙电流失活动力学曲线在加入Vinpocetine后曲线下移，但起点不变。【结论】通过研究Vinpocetine对新生大鼠海马CA3区锥体神经元离子通道电流特性的影响，得出结论如下：1．Vinpocetine对全细胞电流具有

5、抑制作用，其作用具有时间依赖性和浓度依赖性。2．Vinpocetine对全细胞钾电流具有抑制作用，其作用也具有时间依赖性和浓度依赖性。3．Vinpocetine对瞬时外向钾电流具有增强作用，且具有浓度依赖性，瞬时外向钾电流的失活动力学曲线在其作用下左移，提示我们Vinpocetine可能通过增强瞬时外向钾电流而具有神经保护作用。4．Vinpocetine抑制全细胞钙电流且具有时间依赖性和浓度依赖性，并使全细胞钙电流失活动力学曲线下移，高浓度Vinpocetine可能通过抑制钙电流起到神经保护作用。5．Vinpocefine对细胞膜离子通道具有不可忽视的作用，但其在针对离子通道方面的药用价值还

6、需要进一步的实验研究。【关键词】新生大鼠；海马CA3区；锥体神经元；Vinpocetine；全细胞电流；全细胞钾电流；瞬时外向钾电流；全细胞钙电流U[Objective]天津医科大学硕士学位论文AbstractThecharacteristicsoftheionchannelsoncellmembranearedirectrelatedtothechangeoftheneurons’functions．ThepresentstudyexplorestheinfluenceofVinpocetineonwholecellcurrents，wholecellpotassiumcurrents，t

7、ransientoutwardpotassiumcurrentsandwholecellcalciumcurrentsoftheneuronsinneonaterathippocampusCA3area．TheaimistogiveexperimentalsupporttoVinpocetine’sneuroprotectiveeffectonionchannelslevel．[Methods]Neurons