铅对大鼠海马ca1和ca3区bcl2阳性细胞影响

《铅对大鼠海马ca1和ca3区bcl2阳性细胞影响》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、铅对大鼠海马CA1和CA3区Bcl2阳性细胞影响【关键词】铅　　有文献报道，铅的神经毒性可能和脑细胞凋亡有关〔1，2〕。近年来研究表明，海马结构各亚区的Bcl2基因表达异常可能是铅触发海马神经细胞凋亡发生的主要介导因素〔3〕。目前发现，Bcl2（Bcelllymhona/leuRenia2)基因在细胞凋亡调控过程中起着重要作用，Bcl2蛋白不仅具有抗淋巴细胞凋亡作用，也具有抗神经细胞凋亡的作用〔3〕。张荣〔4〕等采用流式细胞仪研究发现，染铅与脑细胞发生凋亡率有剂量反应关系，与Bcl2含量呈现负相关。但染铅对海马不同亚

2、区Bcl2蛋白表达的影响，目前尚不清楚。本研究采用免疫组化法观察染铅不同时点大鼠海马CA1区和CA3区Bcl2阳性细胞数目的动态变化，以了解铅对海马各区细胞的影响。　　1材料与方法　　11实验动物及处理选用刚断乳健康g/（kg·bg/kg）麻醉，开胸，夹闭腹主动脉，经左心室插管，用37℃生理盐水100～150ml快速冲洗后，以含4%多聚甲醛的磷酸盐缓冲液（PBS）（01mol/L,pH74)灌注固定，迅速取脑后，置多聚甲醛中继续固定7～9h（4℃），移入20%蔗糖溶液浸泡12h以上。恒冷箱连续冰冻切片（片厚为50μm),进

3、行Bcl2免疫组化反应。　　122Bcl2免疫组化反应切片移入37℃TritonH2O2中反应30min,PBS缓冲液漂洗后以3%正常羊血清封闭30min，然后加Bcl2一抗（1：200），4℃温盒内孵育72h后，免疫组化法（ABC）显色，常规裱片，脱水，透明，封片。　　123结果判断Bcl2阳性细胞显棕色或棕色反应颗粒，不显色为阴性反应；以Bcl2阳性的癫痫大鼠海马切片为阳性对照，以正常羊血清代替Bcl2一抗作为对照，结果为阴性反应；以01mol/LPBS(pH74)代替Bcl2一抗为空白对照，结果为阴

4、性反应。　　124Bcl2阳性细胞计数每组选取对应断面的海马脑片15张（每只动物取2～3张），采用尺型计数器在相同放大倍数（×200）的光镜下，分别计数CA1和CA3区每毫米的阳性细胞数。　　13统计分析采用SPSS80软件进行分析。　　22不同染铅时间海马区阳性细胞数组间比较(表1)　　表1不同染铅时间大鼠海马各区Bcl2阳性细胞数比较（略）　　注：与对照组比较，*P<005,**P<001;脑片数=15　　3讨论　　有报道〔2，4〕，染铅大鼠大脑皮层、海马和小脑细胞凋亡率均明显高于对照组，Bcl2

5、蛋白是一种神经保护蛋白，其抗凋亡作用与其抗氧化作用有关〔5〕。张荣等发现，大鼠染铅5d后,皮层、海马和小脑Bcl2基因表达下降，Bcl2含量与染铅剂量呈相关〔4〕。鉴于细胞凋亡对于胚胎发育、维持细胞总体数量等过程都具有重要作用，所以脑细胞的凋亡必然会对中枢神经的结构和功能造成损伤。铅对于海马不同亚区神经元的代谢及功能如LTP的影响不同〔6〕，推测铅对海马不同亚区Bcl2阳性细胞的影响可能不同。进一步研究染铅对海马不同亚区Bcl2蛋白表达的影响，将对深入了解铅干扰学习记忆机制提供重要依据。本研究于大鼠染铅12h后，观察到海马C

6、Al区Bcl2阳性细胞数目明显减少(P<001),24h时仍处于较低水平(P<005),而在不同时间染铅组与对照组间海马CA3区Bcl2阳性细胞数差异已无统计学意义(P>005)。铅的神经毒性作用尤其是对学习记忆影响的机制相当复杂，铅对海马不同亚区Bcl2蛋白表达的不同影响仅仅是其分子机制的一个环节，完全阐明铅神经毒性，尤其是对学习记忆影响的机制尚需深入研究，但铅对海马不同亚区Bcl2蛋白表达的不同影响说明其作用机制与海马CAl区细胞凋亡保护基因的蛋白表达水平下调有关。【参考文献】　　〔1〕Savol

7、ainenKM,EerikainonS.Interactionofexcitatoryneruotransmittersanddenobioticsinexcitotoxicityandoxidativestress［J］.GlutamateandLeadToxicolLett,1998,102:363-367.　　〔2〕ObertoA,MarksN,EvansHZ,etal.Lead(Pb2+)promatesapoptosisinneplications［J］.JPharmacolExpTher,1996,279(1):435-

8、442.　　〔3〕HockenberyD,NunezG,MillimanC,etal.Bcl2isaninnermitochondrialmembraneproteinthatblocksprogrammedcelldeath［J］