结节病与不典型结核病鉴别诊断方法的研究

《结节病与不典型结核病鉴别诊断方法的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、摘要背景：结节病和增殖性结核病的临床、病理、免疫特点极为相似，鉴别诊断较为困难。尤其当结核性肉芽肿病理活检未见干酪样坏死，并且抗酸染色阴性——即表现为不典型结核病时，更是临床鉴别的难点。目前国内外鉴别结节病和结核病的研究主要集中在形态学、病因学和遗传学方面。由于形态学表现无法区别不典型病例，我们着眼于从病因学和遗传学方面寻找一种有效方法对二者进行鉴别。在病因学方面，本科室前期的研究【1l应用实时定量PCR方法检测31例结节病和30结核病石蜡包埋病理组织中结核分枝杆菌DNA，结果表明实时定量PCR可以做为鉴别两种

2、疾病的方法之一，该法对两种疾病结核分支杆菌DNA检出的灵敏度为100％，特异性为80．6％。在遗传学方面，国外的研究发现结节病发病具有遗传易感性，与结节病遗传易感性差异以及结节病病程进展有着密切联系的最相关的遗传系统为HLA复合体【2】13】。尽管近年来国外有较多关于结节病与HLA相关性的研究报道，但由于种族和地区差异，研究结果各异14】。因此在中国人群中寻找结节病的HLA易感基因，对于结节病患者的早期诊断和鉴别诊断有一定的指导意义。第一部分实时定量PCR方法在结节病和不典型结核病鉴别中的应用目的：从病因学方面

3、，在本科室前期研究的基础上扩大样本量，进一步分析结节病和结核病病理组织中结核分支杆菌DNA的检出情况，确证实时定量PCR方法在结节病和不典型结核病鉴别中的应用价值，并设立两种疾病鉴别诊断的定量标准。方法：以结核分枝杆菌内插入序列IS986为扩增靶序列，用实时定量PCR法检测104例结节病、31例结核病和55例正常对照者石蜡包埋淋巴结或肺组织中结核分枝杆菌DNA，以H37RV标准结核菌株做外参照系统，管家基因13．actin做内参照系统。结节病、结核病和正常对照组的结核分枝杆菌DNA定性结果的比较采用矿检验，定量

4、结果的比较采用Mann．WhitneyU检验；并运用受试者工作特征(ROC)曲线选取约登指数值(约登指数=灵敏度+特异度一1)最高时的结核分枝杆菌DNA拷贝数作为结节病与结核病的最佳鉴别点，并评价其临床应用价值。结果：外参照和内参照系统均为阳性结果，104例结节病组中20例呈阳性摘要结果(阳性率为19．2％)，31例结核病组中均呈阳性(阳性率为100％)，55例正常对照组中7例呈阳性(阳性率为12．7％)。经矿检验，结节病和结核病组，结核病和正常对照组的阳性率有显著差异(Z2=66．278，P=0．000；Z2

5、=61．229，P=0．000)。结节病组和正常对照组的阳性率无显著差异(92=1．079，P--0．377)。结节病组检出结核分支杆菌DNA的拷贝数为0"-"4．71X103拷贝／m!，结核病组为1．58×102～5．43×107拷贝／ml，正常对照组为0～1．02×103拷贝／ml。经Mann．WhitneyU检验，结节病和结核病组，结核病和正常对照组的定量结果比较差异具有统计学意义03=18．000，P=0．000；U--5．000，P=0．000)；结节病组和正常对照组比较差异无统计学意义(U=2695

6、．000，P=0．361)。ROC曲线显示定性标准鉴别结节病和结核病时，灵敏度为100％，特异度为80．8％；AUCl=0．904；而用结核分支杆菌DNA拷贝数鉴别诊断结节病和结核病时，cutoff值取1．14×103拷贝／ml，灵敏度(Se)=96．8％，特异性(Sp)=98．1％，AUC2=0．994。经Z检验，AUCl和AUC2差别有统计学意义(Z=3．555，P<0．001)。结核分支杆菌DNA拷贝数能较好地用于结节病和结核病的鉴别诊断。结论：实时定量PCR法检测石蜡包埋组织中结核分枝杆菌DNA可作为鉴

7、别结节病和不典型结核病的方法之一，1．14×103拷贝／m!作为定量标准具有很高的灵敏度和特异性，具有可靠的鉴别价值。第二部分HLA-A、B、DRBl等位基因多态性与结节病的相关性研究目的：从遗传学方面，探讨中国汉族人群中结节病遗传易感性与HLA-A、B、DRBl位点基因的相关性，寻找结节病的HLA易感基因。方法：采用聚合酶链反应一序列特异性引物(PCR．SSP)方法，应用美国TexasBioGene公司ABDRMorg矗聊SSP2×96分型试剂盒，包括23对A特异性引物、48对B特异性引物、24对DRBl特异

8、性引物及一个阴性对照，共96个PCR体系，对46例结节病患者和40例健康对照者进行HLA-A、HLA-B及DRBl基因分型。结果：结节病组中I-ILA．DRBI*ll等位基因频率明显高于正常对照组(15．22％VS1．25％，P<0．05)：HLA．B*13和HLA-DRBl*07等位基因频率明显低于正常对照组(3．26％VS15％。P<0．05；4．35％VS16．25％，P<0．0