环介导等温扩增检测下呼吸道感染致病菌的研究

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1、中文摘要目的建立应用环介导等温扩增(100p—mediatedisothermalamplification，LAMP)检测下呼吸道感染常见致病菌的方法，并将该法应用于临床痰样本的检测，同时与痰培养法比较，探讨该法在下呼吸道感染诊断中的应用价值；据LAMP法的结果分析呼吸科下呼吸道感染的病原菌分布，为临床经验治疗提供依据。方法1．选择下呼吸道感染常见的11种病原菌：肺炎链球菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、铜绿假单胞菌、肺炎克雷白杆菌、流感嗜血杆菌、嗜麦芽窄食单胞菌、鲍曼不动杆菌、军团菌、肺炎支原体、肺炎衣原体为检测菌株。通过BLA

2、ST、AlignX和Primer5．0程序设计合成本实验所需引物；2．收集内蒙古医学院第三附属医院呼吸科诊断为下呼吸道感染患者的合格痰标本100例，提取痰样品DNA进行等温扩增及实时荧光检测，测定熔解曲线，进行数据分析，同时测试该检测体系的灵敏度和特异性；比较LAMP法与痰培养的结果；3．据LAMP法的结果分析呼吸科下呼吸道感染的病原菌分布。结果1．该检测体系的灵敏度高、特异性好，．LAMP法和培养法阳性率分别为64％和25％，差异有显著性(P<0．05)；2．呼吸科下呼吸道感染病原菌的分布，细菌占75．9％、非典型病原菌占24

3、．1％；革兰阴性杆菌为主要致病菌(57．5％)，前三位依次为鲍曼不动杆菌、铜绿假单胞菌、肺炎克雷白杆菌。结论LAMP法是一种敏感、高效的下呼吸道感染病原菌检测方法；革兰阴性菌为呼吸科下呼吸道感染的主要致病菌，抗菌治疗要针对病原菌的分布特点选择敏感药物。关键词环介导等温扩增下呼吸道感染致病菌StudyonLoop·--mematedIsothermalAmplificationforDetectionofPathogenicBacteriainLowerRespiratoryTractInfectionsAbstractObjec

4、tiveToestablishamethodfordetectionofcommonlyencounteredpathogenicbac—teriainlowerrespiratorytractinfectionsbyloop—mediatedisothermalamplification(LAMP)，themethodisusedtodetectclinicalsputumspecimensandtheresultsarecomparedwithspu—turnculturetoevaluatethediagnosticval

5、ueofitinlowerrespiratorytractinfections；Toaria-lyzethedistributionofpathogenicbacteriacausinglowerrespiratorytractinfectionsinrespira-torydepartmentbasedontheresultsoftheLAMPtoofferthebasisofrationaluseofantibioticsforclinicians．Method1．Streptococcuspneumonia，Staphyl

6、ococcusaul'eUS，EscherichiaCO-li，Pseudomonasaeruginosa，Klebsiellapneumoniae，Haemophilusinfhenzae，Stenotroph·omonusmaltophilia，Acinetobacterbaumannii，Legionnellapneumophila，Mycoplasmapneu-moniae，Chlamydiapneumoniaewerechosen鹪identifiedbacteria．Apairofeverybacterium惫LAM

7、PprimerssequenceweredesignedbyBLAST。AlignXandPrimer5．0program．2．Col-lectedqualifiedsputumsamplesfrom100patientswithlowerrespiratorytractinfectionsoftherespiratorydepartmentinthethjrdaffiliatedhospitalofInneerMongoliaMedicalCollege，ex-tractedDNAfromsputumsamplesthenus

8、edLAMPtoamplifyanddetectedbyreal—-timePCRinstrument，determinedthemeltingcurveandanalyzedthedata．Thesensitivityandspecifici—t)rofthe