川西高原及秦巴山区核桃遗传多样性的RAPD和AFLP标记研究

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1、摘要核桃是果材兼用的优良经济树种，它作为四大干果之一，有极显著的经济效益和生态效益。本试验以川西高原和秦巴山区收集的35份核桃种质资源为研究对象，运用AFLP和RAPD两种分子标记，结合种群生态、形态学特征分析，运用系统聚类分析方法，对35份核桃种质材料的遗传多样性进行了研究。主要结果如下：(1)从引物筛选、酶切连接、扩增条件、检测方案等几个方面进行优化，建立了核桃RAPD和AFLP最适反映体系，在此优化体系下，可以得到重复性好、稳定且多态性高的核桃RAPD、AFLP条带。(2)对核桃遗传多样性研究表明：32条RAPD随机引物在核桃群体中共扩增出

2、324条带，平均每个引物扩增出10．1条带。其中，呈多态性的条带有279条，多态性比率为86．11％；而lO对AFLP引物组合在核桃群体中共扩增出769条带，平均每个引物扩增出76．9条。其中，呈多态性的条带有440条，多态性比率为57．2％，表明核桃类群遗传结构复杂，遗传多样性丰富。(3)聚类分析表明：秦巴山区由于相互引种，基因交流频繁，导致当地核桃种质的基因型趋于一致，其遗传差异不大，群内和类群间遗传距离相对较小，从而表现出较亲的亲缘关系；而川西高原由于地理上的隔离，交通不便，基因交流较少，当地丰富的基因资源得以保存，具有良好的遗传多样性，对

3、核桃种质资源的保护和开发有十分积极的意义。(4)通过对两种分子标记的比较研究表明，RAPD所发现的基因位点数量上要少于AFLP。尽管每对AFLP引物组合的多态率要低于RAPD单个引物的多态率，但是每对AFLP引物组合揭示的有效多态性带数要明显高于RAPD引物，另外AFLP标记的假阳性低。关键词：川西南高山峡谷区；秦巴山区；核桃；RAPD标记；AFLP标记；遗传多样性AbstractChinaisamajorareafororiginandgeneticvariationofwalnut，whichhasabundantnutrime删materi

4、al，vitamin，andithasalongplantinghistory．Itisanimportantfruitandwoodyspecies．Thegeneticdiversitiesof35walnutssamplesderivedfrom7differentregionsinPlateauofWesternSichuanProvinceandQinbamountainousregionswereinvestigatedusingAFLPandRAPDmethods．Tocombinewithmorphologicalandagron

5、omicaltraits，theresultswereasfollows：1、BasedonthegenomicDNAextractedfromWalnut，essentialfactorsaffectingtheresultofRAPDandAFLPassayweretestedandcompared．TheresearchapprovedthatanoptimalreactionsystemwassuitablefortheassayandusageofRAPDandAFLPinWalnut．2、Intheresearch，324RAPDfr

6、agmentswereproduced，279(86．1％)oftotalbandsshowedpolymorphicwiththesizerangingfrom180to2000bp，and10．1fragmentsperprimerwereamplifiedonaverage；769AFLPfragmentswereshowedbytwentyeightprimers，and440polymorphicbandsweregenerated，thepercentageofpolymorphicbandswas57．2％．3、waln矗inPla

7、teauofWesternSichuanProvinceshowedhighestpolymorphismdetectedbybothRAPDandAFLPmarkers．ThehighnumberofallelesandthehighexpectedgeneticdiversitydetectedwithRAPDandAFLPmarkersmakethemasuitabletoolforwalnutcultivaridentification，confirmingthesemarkerstransportabilityamonggenerali

8、nthewalnutfamily．4、Inthestudy,RAPDmarkersdetectafewgeneticlocithanAF