核酸适体用于肿瘤细胞的检测与富集研究

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1、核酸适体用于肿瘤细胞的检测与富集研究摘．要探索肿瘤细胞检测新方法对于实现癌症的早期诊断和预防具有极其重要的意义。传统的肿瘤细胞检测方法主要依靠形态学特征进行判定，存在敏感性低，易产生假阳性信号等局限性。核酸适体作为一类新型分子探针，既可作为识别探针0实现对靶肿瘤细胞的特异性结合，亦可利用其酶催化活性构建信号探针，且由于◆’其亲和力高、特异性好、易筛选、易修饰、易储存等优点，在肿瘤细胞的检测和’富集中有着广泛的应用前景。本文以人急性淋巴白血病CCRF．CEM细胞及人宫颈癌Hela细胞为检测对象，将核酸适体探针应用于肿瘤细胞检测和富集中，发展了对肿瘤细胞检测

2、和富集的新方法。具体如下：1．基于核酸适体G四聚体．叶酸复合物的肿瘤细胞检测研究选择具有酶催化作用的核酸适体G四聚体．Hemin复合体作为信号发生单元，通过氨基．羧基交联将G四聚体与对叶酸受体高表达肿瘤细胞具有靶向识别作用的叶酸分子共价连接，制备了G四聚体．叶酸复合物。结合G四聚体一Hemin复合体在双氧水存在的情况下能催化ABTS氧化显色作用和叶酸分子对表达叶酸受体的肿瘤细胞的靶向识别功能，通过酶标仪检测酶催化产物在414nm处的吸收值，实现了对叶酸受体高表达的Hela细胞的特异性定量检测，检测限达到了每毫升103个细胞，有望成为一种广谱性检测叶酸受体

3、高表达肿瘤细胞的方法。2．基于核酸适体和信号DNA功能化金纳米颗粒的肿瘤细胞检测研究．选择对CCRF．CEM细胞具有靶向识别作用的核酸适体sgc8c作为识别单元，利用信号DNA分子作为信号发生单元，结合高比表面积的金纳米颗粒作为载体以提高核酸探针修饰丰度，开展了基于核酸适体和信号DNA功能化金纳米颗粒的肿瘤细胞检测研究。在该研究中，首先通过巯基将sgc8e交联到金纳米颗粒上，再将信号DNA杂交在sgc8c的延伸序列上，成功制备了基于核酸适体和信号DNA功能化金纳米颗粒的肿瘤细胞检测探针，在靶向识别结合目标细胞后释放出信号DNA，再利用分子信标对信号DNA

4、进行检测，实现了对CEM细胞的特异性检测。在没有结合信号DNA扩增检测技术的情况下，每毫升104个目标细胞即可产生明显的检测信号。3．基于核酸适体靶向识别功能的肿瘤细胞磁分离和富集研究选择对CCRF．CEM细胞具有靶向识别作用的核酸适体sgcSc为识别单元，通过采用生物素．链霉亲和素交联方法，将sgc8e修饰在磁性微米磁球上，成功制备了能特异性结合CEM细胞的核酸适体功能化磁珠。该功能化磁珠在对目标细胞的捕获后，利用简单的磁分离手段即可实现对目标细胞的特异性分离和富集，捕获检测限达到了每毫升102个细胞，分离纯度超过了95％。该方法既可以作为其Il’一，

5、◆’’硕士学位论文他检测手段的辅助分离、富集方法，又可以作为一种在光学显微镜下直接检测目标细胞的方法，具有一定的实用价值。关键词：核酸适体；肿瘤细胞检测；G四聚体；金纳米颗粒；信号DNA：磁分离Ul■，p，，●核酸适体用于肿瘤细胞的检测与富集研究AbstractDevelopmentoftumorcelldetectionmethodshassignificantmeaninginearlycancerdiagnosisandprevention．Traditionaltumordetectionmainlyreliesonthe·morphologic

6、alcharacterization，whichisinsensitiveandoftenleadstofalsepositiveresults．Asanovelmolecularprobe，aptamercouldnotonlybeusedasarecognitionprobetotargetspecifictumorcells，butalsobeusedasasignalgenerationprobe．Moreover,aptamerisgreatlypotentialfortumorcelldetectionandenrichmentbecause

7、ofitsuniqueadvantages，suchashighaffinity,highspecificity,facileselection，andeasymodificationandSOon．Inthisarticle，bychoosingCCRF-CEMtumorcellsandHelatumorcellsasthetargetmodels，aptamerhasbeenappliedinthedevelopmentoftumorcelldetectionandenrichmentmethods．1．Studyonthetumorcelldete

8、ctionusingaptamerGqua—folatecomplexAptam