番茄果实蔗糖磷酸合成酶基因的克隆和番茄遗传转化体系的研究

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1、山东农业大学硕士学位论文番茄果实蔗糖磷酸合成酶基因的克隆和番茄遗传转化体系的研究姓名：孙丽萍申请学位级别：硕士专业：蔬菜学指导教师：杨建平;于喜艳20050525关于学位论文原创性和使用授权的声明本人所呈交的学位论文，是在导师指导下，独立进行科学研究所取得的成果。对在论文研究期间给予指导、帮助和做出重要贡献的个人或集体，均在文中明确说明。本声明的法律责任由本人承担。本人完全了解山东农业大学有关保留和使用学位论文的规定，同意学校保留和按要求向国家有关部门或机构送交论文纸质本和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权山东农业大学可以将本学位

2、论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。保密论文在解密后应遵守此规定。论文作者签名：豳半导师签名：：龆￡差每FI期：22呸冬．汨胆四山东农业人学顾i．学位论文番茄果实蔗糖磷酸合成酶基因的克隆和番茄遗传转化体系的研究摘要本试验通过RT-PCR方法，克隆到了番茄果实蔗糖磷酸合成酶(SVS)基因全长cDNA，在GenBank中的登记号为AY726439。并以自交系T6为材料，对番茄的遗传转化体系进行了优化，通过农杆菌介导法，将甜瓜果实反义酸性转化酶基因转化番茄，得到了卡那霉素抗性

3、苗，具体的研究结果如下：用异硫氰酸胍．苯酚．氯仿一步法，提取番茄自交系20一19果实总RNA。经测定表明，所提RNA无降解，纯度高，符合实验要求。根据GenBank中已登记的番茄、马铃薯等蔗糖磷酸合成酶基因的保守序列设计特异引物，通过RT-PCR方法，从番茄自交系20．19果实总RNA中克隆到目的片段，将其克隆入T载体进行测序，结果表明该片段为目的基因的全长cDNA，长3373bp，编码区序列长3162bp，编码1054个氨基酸。序列分析表明，它与GenBank中登记号为AB051216的番茄蔗糖磷酸合成酶基因高度同源，核苷酸序列的同

4、源性为98％。与其它几个种的同源性比较表明，所克隆的番茄SPS基因核苷酸序列与GenBank中登记号为X73477的马铃薯的同源性为96％，与登记号为AFl94022的普通烟草的同源性为92％，与登记号为AF439861的甜薯的同源性为82％。该基因已在GenBank中注册，登记号为AY726439。通过番茄遗传转化体系的优化试验，确定番茄自交系T6种子消毒方法为先用酒精处理30秒，再用O．7％NaCLO(有效氯含量)处理20分钟，最佳的愈伤组织诱导及不定芽分化培养基为MS+ZT2．0mg／L+IAA0．5mg／L，最佳的生根壮苗培养

5、基为MS+IAA0．5mg／L，最适合做转化的外植体为子叶，卡那霉素的晟终筛选浓度为50m∥L。采用农杆菌介导法，将甜瓜果实反义酸性转化酶基因转化番茄自交系T6，得到了卡那霉素抗性苗。关键词：番茄，蔗糖磷酸合成酶基因，克隆，遗传转化番茄果实蔗：糖饿敞合成酶基闲的克降和番茄遗传转化体系的研究CloningofSucrosePhosphateSynthaseGeneinTomatoFruitandstudyontomatogenetictransformationsystemAbstractInthisresearch，wecloneds

6、ucrosephosphatesynthasegenecompleteeDNAfromtomatofruitviaRT-PCR，analyseditssequence，ItsaccessnumberinGenBankisAY726439．Theregenerationsystemof“T6”tomatowasoptimized。Melonfruitacidinvertasegeneantisensevectorwastransferredinto“T6”tomatomediatedbyagrobacteriumtumefacienss

7、trainLBA4404．Kanamycin—resistancetomatoplantletswereobtained．Thedetailsareasfollows：“20·19’'tomatofruittotalRNAwasextractedviaonestepofThiocynate—Phenol-Chloroformmethod．TheresultshowedthattheRNAextractedhadhighpurity．mettheneedofexperiment．TheRT-PCRprimersweredesignedb

8、asedontheconsensusdomainofsucrosephosphatesynthasegenesuchastomatoandpotatoregisteredinGenBank．Theaimedproduct