甜菜蔗糖磷酸成酶(sps)基因的克隆及其遗传转化

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1、中文摘要i———ii—i—一；—————————————————————I———————————————I———————————IIiiiiii甜菜是我国糖料作物之一，在我国北方地区种植，在育种过程中，主要的目的是培育出高产、高糖、高品质的新品种甜菜。在甜菜的生产中病虫害较多，从而影响到甜菜的质量和品质。为了使植物生长性状得到改变，基因工程是最直接有效的手段。由于基因工程具有周期短，见效快等优点，所以，基因工程在植物新品种选育中是一条有效的途径。由于建立甜菜植株再生体系比较困难，较低的遗传转化效率，具有较差的重复性。因此。甜菜植株再生体系及遗传转化体系的

2、建立，转化并培育出优质、高立的甜菜新品种是许多研究者的目标，具有很大意义。本研究是通过RT-PCR扩增技术，将甜菜的蔗糖磷酸合成酶(SeS)基因克隆出来，进行重组质粒的构建，将目的基因利用农杆菌介导法导入甜菜，转化条件得到了优化，建立了稳定的甜菜叶柄遗传转化体系，获得转蔗糖磷酸合成酶基因的甜菜再生植株。主要研究结果如下：】．对SPS基因进行扩增利用RT-PCR方法从甜菜嫩叶片总RNA中克隆出甜菜的SPS基因。进行测定序列，该序列与甜菜SPS基因编码区的核苷酸序列其同源性可达100％。2．构建植物表达载体利用pMDl8-TVector克隆载体的介导，将SP

3、S基因与质粒pBll21连接，构建了以CaMV35S为启动予和Tnos为终止子的植物双元表达载体，该载体含有选择标记基因npttI。3．农杆菌介导法优化了甜菜叶柄遗传转化体系结果显示：将生长到对数生长期的农杆菌菌液重悬稀释，确定了浓度OD600值为0．6；叶柄外植体经过48h的预培养，确定侵染时间为5min；确定了共培养培养基中乙酰丁香酮的浓度为1001amol／L；确定了22。C～25。C共培养4d；经过头孢霉素的抑菌，确定了200mg／L的Kan浓度的筛选。黑龙江大学硕士学位论文4．对获得的阳性植株检测用农杆菌介导法将SPS基因转入甜菜，经过筛选培养

4、共获得27株抗Kan的甜菜稳定再生植株。提取27株基因组DNA，经PCR检测有8株呈阳性植株，PCR阳性率为29％。关键词：甜菜；蔗糖磷酸合成酶；基因克隆；遗传转化AbstractSugarBeetisoneofourcountrysugarcrops，mainlygrowinnorthChina，inthebreedingprocess，themainpurposeistOcultivatehighyield、highsugar、highqualityvarietiessugarbeet．Intheproductionofsugarbeettherea

5、remorediseasesandinsectpests，thusaffectingthequalityofthesugarbeet．InordertOchangetheplantgrowthcharacter，geneticengineeringisthemostefficientmeans．Becausegeneticengineeringhastheadvantagesofcycleshort、quickresults．SogeneticengineeringisaneffectivewayinnewvarietiesofplantsDuetoes

6、tablishsugarbeetplantregenerationsystemmoredifficult，genetictransformationefficiencyislow，repeatabilityisbad．therefore，sugarbeetplantregenerationandgenetictransformationsystemisestablished，producedhighquality，highyieldofsugarbeetvaretiesisthegoalofmanyresearchers，withagreatsignif

7、icance．ThisresearchisthroughtheRT-PCR，sugarbeetSPSgenehasbeencloned，constructedrestructuredplasmid，Using．,49robaterium-mediatedtransformationisgoingtopurposegenetoleadsugarbeet，convertingconditionsareoptimized，thisstudyestablishedstabletransformationsystem，getofSPSgeneturnedsugar

8、beetofregenerativeplants．Themainresultsa