恒定磁场对Schwann细胞氧化损伤保护作用机理的实验研究

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1、山东大学硕=t学位论文恒定磁场对schwann细胞氧化损伤保护作用机理的实验研究中文摘要目的：长期以来，周围神经病变严重影响着人们的生活质量，是神经科学研究领域中的一个复杂但十分重要的病变过程。近年来的研究发现，其发病机理之一是氧化应激引起氧自由基增多，从而导致schw锄细胞的凋亡。schw枷细胞是周围神经系统特有的胶质细胞，包绕轴突形成有髓纤维或无髓纤维，并分泌多种与神经系统发育和再生密切相关的因子。近年来，通过外晃因素(如各种神经生长因子、中药、电磁场、硅胶管及其他移植物等)干预Schw锄细胞，进而促进周围神

2、经损伤后再生的研究日趋增多。古今中外大量资料表明，磁场具有治病健身的作用。迄今已证实，外加磁场主要通过影响细胞类脂液晶膜层及细胞间的协调整合关系，对机体产生治病健身的作用。磁场通过多种方式应用于临床，如：静磁疗法、复合磁疗法、经络磁疗法和磁水疗法等。磁疗技术具有操作简单、见效快、副作用小、无痛苦等优点，能治疗多种疾病，如妇女痛经、颈椎病、癫痫病、精神疾病、青光眼、白内障、高血压和偏头痛等。磁场不仅能够促进毛细血管增生、促进表皮生长、加速溃疡愈合，还可以调整心血管功能，改善心脏病的血液循环，缓解心绞痛等。磁疗水可增

3、加细胞的渗透性，提高消化酶的活性，增强消化功能；对结石的形成有抑制作用，对已形成的结石有溶解、促排作用，能治疗胆结石、胰腺结石、泌尿结石等。根据磁场与时间的关系，磁场可分为恒定磁场和变动磁场。恒定磁场具有恒定的磁场强度，是最基本、最简单的一种磁场，适合作基础性研究。目前，磁疗技术已在临床上广泛应用，但是人们对磁场治疗疾病的机理的认识还十分有限，而恒定磁场对schw枷细胞的抗氧化保护作用及其机制的研究尚未见报道。本课题通过建立过氧化氢诱导的schwa柚细胞氧化损伤模型，并在此模型的基础上，观察4mT恒定磁场对氧化损

4、伤的sdlwaIln细胞的保护作用，通过MTT、生化检测、免疫组化等方法进行细胞活力测定、酶活力分析、C勰pa∞．3的表达，山东大学硕士学位论文探讨恒定磁场抗氧化损伤的作用机理，为揭示恒定磁场治疗周围神经病变的机制提供理论依据。方法：本课题以72小时内新生wistar大鼠的坐骨神经和臂丛神经为实验材料，用含10％胎牛血清的DMEM／F12培养液于5％c02、370C、饱和湿度的细胞培养箱中培养。schw猢细胞培养24小时后，分为3个实验组，另设一空白对照组。1．4玎1T恒定磁场的准备将两块磁铁上下依次放置，利用特

5、斯拉计测定二者之间的空间磁场强度为4n1T，然后将其放置于5％c02、370C、饱和湿度的培养箱内。2．Schw姐n细胞的纯化及鉴定阿糖胞苷抑制成纤维细胞及传代纯化雪旺细胞。实验前雪旺细胞爬片S．100免疫组化染色，鉴定雪旺细胞。3．氧化损伤处理及恒定磁场处理细胞培养时分三组：①过氧化氢损伤组：终浓度为lO叩moI／L；②过氧化氢+恒定磁场保护组：10陬mol／LH202+恒定磁场；③正常组(不加任何因素)；同时设仅加培养液的空白对照组。4．M，rr法进行恒定磁场抗过氧化氢氧化损伤的作用分析。5．生化检测细胞内脂

6、质过氧化物MDA和超氧化物歧化酶sOD水平。6．应用免疫组织化学方法，测定正常对照组、过氧化氢损伤组及恒定磁场保护组三组细胞C硒pa∞-3蛋白酶的变化。通过以上的实验，建立了过氧化氢诱导schw锄n细胞的氧化损伤模型，在此模型的基础上探讨4mT恒定磁场对schwalln细胞抗氧化损伤保护作用的机理。结果：刚接种的原代schw籼细胞呈圆形，悬浮在培养液中，接种6h后大部分细胞贴壁，部分细胞开始呈椭圆形，24h后变成双极，胞体饱满，立体感强，少数呈三角形，伸出三个突起。培养48～72h后，出现聚合现象，许多细胞聚合在

7、一起呈端对端、肩并肩、漩涡状或栅栏状排列，在细胞密度较低时，则聚集成堆，形成“细胞岛”，免疫细胞化学染色为s．100阳性；另一种细胞稍大，外形不规则，呈扁平状，突起短而多，核较浅，为成纤维细胞，所占比例较低。培养24小时后加终浓度为10-5mol／L的阿糖胞苷，48小时后换液去除阿糖胞苷，镜下观察Schw猢细胞的纯度明显增加，免疫化学染色显示80％以上的细胞S．100呈阳性反应。加入H20212小时后，在倒置显微镜下观察发现细胞的形态发生改变，细2山东大学硕士学位论文胞突起萎缩，胞体肿胀变圆，细胞数量减少。部分细

8、胞脱壁漂浮于培养液中，胞体立体感差，折光度下降，并可见大量细胞碎片；恒定磁场保护组的细胞生长状态良好，胞体饱满立体感强，少见细胞皱缩破碎现象，但细胞聚团现象较明显；正常组的细胞状态长势很好。不同实验组检测结果如下：1．Mrr法进行恒定磁场抗氧化损伤的作用分析表明：恒定磁场可明显拮抗过氧化氢诱导的氧化损伤，与过氧化氢损伤组相比，恒定磁场保护组可维持较高的细胞存活率，二者之间