应用植入后胚胎培养方法研究环境雌激素多氯联苯同系物PCB153对小鼠胚胎发育的影响

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1、第三军医大学硕士学位论文应用植入后胚胎培养方法研究环境雌激素多氯联苯§同系物PCB153对小鼠胚胎发育的影响摘要背景与目的随着工业化进程大量化学污染物被排放到环境中其中具有雌激素样活性可模拟内源性雌激素的生理生化作用或具有拮抗雄激素效应的化学物质称为环境雌激素(environmentalestrogens)这类物质对人类和动物的健康危害极大可引起生殖障碍发育异常某些癌症以及有关生态学效应目前已引起人们的广泛关注多氯联苯(polychlorinatedbiphenylsPCBs)是环境雌激素类污染物之一有209种同系物在环境中难于降解如同系

2、物PCB153和PCB180在环境中的平均滞留时间分别为110年和70年据世界卫生组织报道PCBs污染范围很广几乎存在于生态系统的每个环节PCBs可以通过多种方式迁移并富集于食物链中具有高脂溶性对人和动物有高度蓄积毒性野生动物和人体脂肪组织乳汁和血清中都能检出PCBs并可通过胎盘或乳汁使胎儿或哺乳的婴儿受到影响多氯联苯同系物PCB153持续存在于环境中肌体内且因不易降解使它成为人体脂肪组织中三种主要同系物之一它也是人乳中浓度最高的同系物由此可见PCB153与人类健康关系密切据报道PCBs不但具有环境雌激素的一般特性还可以造成机体多系统损害

3、为了解PCBs对胚胎发育的直接影响我们拟选择植入后胚胎培养方法进行观察研究孕8.5-9.75d是小鼠胚胎神经管关闭时期也是中枢神经系统原基形成时期对未来中枢神经系统的发育尤为重要这一时期多数器官原基也已形成胚胎发育易受环境因素影响但未见PCB153对此阶段胚胎发育影响研究的报道故本实验采用植入后全胚胎培养方法来观察研究PCB153对小鼠胚胎的致畸作用和对中枢神经系统发育的影响为防治环境污染导致的胚胎畸形提供实验依据同时建立PCB153致小鼠胚胎畸形发育的全胚胎培养模型为以后研究PCB153致畸作用机制奠定基础观察卵黄囊超微结构改变了解卵黄

4、囊VYS受损与PCB153引起胚胎异常发育的关系方法1将胚龄8.5天小鼠胚胎移植到体外有不同浓度PCB153的大鼠血清培养基中培养28小时收获胚胎与对照组及体内发育到相同时期的鼠胚进行比较和评分经统计学分析后判断PCB153对胚胎生长发育的影响观察指标包括胚胎生长发育终点§基金资助重庆市科技计划资助项目No.200210775第三军医大学硕士学位论文包括VYS直径颅臀长头长体节数和胚胎组织器官分化终点包括VYS血管发育心脏神经管关闭翻转后脑中脑和前脑鳃弓上下颌突前后肢芽听系统视系统和嗅系统2透射电镜观察PCB153对VYS超微结构的损害结

5、果1空白组和溶剂组培养的胚胎与体内同期发育的胚胎基本一致经统计学分析相互间差别不显著P>0.052PCB153对小鼠胚胎发育具有明显影响且呈剂量-效应关系PCB153为0.10ng/ml时除VYS循环稍差外其余指标与对照组一致或差异不显著(P>0.05)PCB153为1.00ng/ml时明显影响VYS循环头长颅臀长体节数中脑后脑翻转鳃弓和上下颌突等指标与对照组比较差异显著P<0.05PCB153为10.00ng/ml时各指标评分进一步降低未见正常发育胚胎畸胎发生率增高并出现胚胎死亡还表现中枢神经系统畸形主要为后脑或和中脑形态异常翻转异常以

6、及小头畸形等未见神经管关闭缺陷3透射电镜下发现PCB153使VYS内皮层上皮细胞表面的微绒毛数量减少变短和排列不规则胞内溶酶体数量减少电子密度减低线粒体不同程度肿胀嵴不规则或断裂胞内大量空泡变性和髓鞘样结构未见粗面内质网高尔基体和核蛋白体等核内异染色质聚集常染色质不丰富间质层血管数量少红细胞少间皮层细胞排列紊乱表面微绒毛数量少短和排列不规则间皮细胞肿胀和空泡变性等结论1成功建立了植入后小鼠胚胎在神经管关闭时期全胚培养模型2PCB153能够抑制神经管关闭时期鼠胚的生长发育和形态分化存在明显的剂量效应关系PCB153作用的敏感部位是VYS循环

7、头长颅臀长中脑和鳃弓等部位PCB153能够导致鼠胚神经系统畸形发育3PCB153对VYS超微结构的损害与PCB153引起胚胎异常发育有关关键词植入后全胎培养环境雌激素/PCB153胚胎发育卵黄囊6第三军医大学硕士学位论文Studyontheeffectsofoneofenvironmentalestrogenspolychlorinatedbiphenylcongener153onmouseembryonicdevelopmentbyusinginvitropost-mplantationwholemouseembryocultureAb

8、stractBackgroundandaims:Withthedevelopmentofindustrialization,therearevariouschemicalcompoundsdi