长期高盐摄入诱导自发性高血压大鼠心肌自噬性空泡形成

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1、分类号：R54密级：学位类别：科学学位团专业学位口学校代码：1062学号：2010602689学科门类：医学又坪鲁斜文学硕士学位论文MASTER’SDISSERTATIoN论文题目：长期高盐摄入诱导自发性高血压大鼠心肌自噬性空泡形成TITLEChronichighsaltintakeinducescardiomyocyteautophagicvacuolizationinSpontaneouslyHypertensiveRats一级学科：临床医学二级学科：内科学心血管病论文作者：毕莹指导教师：李玉明教授导师组成员：周欣副教

2、授天津医科大学研究生院二。一三年五月学位论文原创性声明lIlllllIlllJllllJlllrrlllllllllllllIIIIIY2396509本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下独立进行研究工作取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容和致谢的地方外，论文中不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示了谢意。学位论文作者签名：望益日期：阳房年弓月多f日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解天津医科大学有关保留、使用学

3、位论文的规定，即：学校有权将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校向国家有关部门或机构送交论文，并编入有关数据库。保密口，在——年解密后适用本授权书。本论文属于不保密囹。(请在相对应的方框内打“√”)学位论文作者导师签日期：加B年孑月弓7日日期：伊哆年g月弓／日天津医科大学硕士学位论文中文摘要目的：长期高盐负荷不仅能引起血压水平增高，还可以独立于血压水平直接引起靶器官的损伤。在前期工作中我们发现，经饮食摄入8．0％NaCI能够促进自发性高血压大鼠(

4、spontaneouslyhypertensiverats，SHR)左心室结构和功能异常的出现，并且左心室由代偿性肥厚演变至失代偿性肥厚的关键时间窗为高盐负荷后8～12周。在相关病理学分析中我们观察到12周SHR大鼠心肌组织存在大量的空泡样结构，并且高盐组空泡的数量和面积明显高于低盐组，提示心肌组织的这种空泡结构可能与长期高盐摄入有关。因此，本研究旨在阐明SHR大鼠心肌组织空泡样结构的形成机制，及其与高盐负荷所致左心室功能和结构重塑的关系。方法：7N龄SHR及京都Wistar大鼠(WistarKyotorats，WKY)，

5、经适应性喂养1周后，随机分为低盐饮食组(0．5％NaCl)和高盐饮食组(8．0％NaCl)两个亚组。在饮食盐干预8周、12周、16周末行有创血流动力学检测。检测结束后，心脏经冷生理盐水灌流，摘取心脏，左心室取一小块组织(O．5x0．5xlcm3)经2．5％戊二醛固定后行透射电子显微镜超微结构形态学检测，其余组织保存于．800C冰箱。组织包埋、切片后行苏木素伊红(hematoxylinfeosin，HE)染色、油红O染色、阿尔新蓝一过碘酸／希夫(alcianblue／periodicacid—schiff,AB—PAS)染色

6、、甲苯胺蓝染色以检测心肌空泡内物质成份，行麦胚凝集素(wheatgermagglutinin，WGA)染色检测心肌细胞横截面积，Masson染色检测心肌纤维化程度。Westernblot检测自噬相关蛋白和转录因子张力应答增强子结合蛋白(tonicity．responsiveenhancerbindingprotein，TonEBP)的表达量。体外研究采用大鼠H9e2细胞系，在额外添jJHNaCl(最终作用浓度分别为25mM，50mM，100mM，150mM，分别相当于350mOsm／L，400mOsm／L，500mOsm／

7、L，600mOsm／L的渗透压)的完全生长培养基中培养24h，加入Na+荧光探针CoroNaGreen，用流式细胞仪检测细胞内荧光强度。有报道显示SD大鼠食用含有8．0％NaCl的高盐饮食2周后皮肤中Na+浓度升高40mM。基于前期研究和CoroNaGreen的检测结果，我们在正常培养基中额外加入50mMNaCl，使渗透压达至lJ400mOsm／L，以模拟长期高盐负荷诱导的细胞外高渗环境。50mMNaCl培养基干预H9c2心肌细胞一定时间后用实时定量天津医科大学硕士学位论文PCR和Westemblot检测自噬相关基因和蛋白

8、表达水平。50mMNaCl培养基干预H9c2心肌细胞24d,时后用AnnexinV检测细胞凋亡。用50raMNaCI，50mMCsCl，100mM甘露醇(400mOsm／L)和不同浓度活性氧(reactiveoxygenspecies，ROS)清除剂N．乙酰半胱氨酸(N．acetylcysteine，N