饥饿对大鼠心肌自噬影响的实验研究

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1、中图分类号：R363论文编号：HBLG2015-232UDC：密级：公开硕士学位论文饥饿对大鼠心肌自噬影响的实验研究作者姓名：张建凯学科名称：麻醉学研究方向：麻醉与危重症医学学习单位：华北理工大学学习时间:3年提交日期：2015年5月7日申请学位类别：临床医学硕士导师姓名：张小平教授单位：华北理工大学附属医院论文评阅人：贾慧群教授单位：河北医科大学第四医院张树波副教授单位：华北理工大学附属医院论文答辩日期：2015年6月8日答辩委员会主席：姜保国教授关键词：自噬；饥饿；心肌；LC3；Beclin1唐山华北理工大学2

2、015年6月ExperimentStudiesonEffectsofStarvationonMyocardiumAutophagyofRatsDissertationSubmittedtoNorthChinaUniversityofScienceandTechnologyinpartialfulfillmentoftherequirementforthedegreeofMasterofMedicinebyZhangJiankai(Anesthesiology)Supervisor:ProfessorZhangXia

3、opingJune,2015独创性说明本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，也不包含为获得华北理工大学以外其他教育机构的学位或证书所使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中做了明确的说明并表示了谢意。论文作者签名：日期：年月日关于论文使用授权的说明本人完全了解华北理工大学有关保留、使用学位论文的规定，即：已获学位的研究生必须按学校规定提交学位论文，学校有权保留、

4、送交论文的复印件，允许论文被查阅和借阅；学校可以将学位论文的全部或部分内容采用影印、缩印或编入有关数据库进行公开、检索和交流。作者及导师同意论文公开及网上交流的时间：□自授予学位之日起；□自年月日起。作者签名：导师签名：签字日期：年月日签字日期：年月日摘要摘要目的饥饿是食物供应或摄入受到限制而使机体处于营养物质和能量摄入不足或缺乏的状态。自噬是在真核细胞内普遍存在的重要生物学现象，广泛参与多种生理病理过程，其主要作用之一是降解细胞自身物质并利用降解产物提供能量和重建细胞结构、维持细胞稳态。本研究拟探讨饥饿对大鼠心肌

5、自噬的影响，为整体水平的自噬研究提供实验依据和参考。方法健康雄性SPF级SD大鼠105只，3月龄，体重330~370g，采用随机数字表法，分为2组：正常对照组（C组，n＝15）和饥饿模型组（S组，n＝90）；其中，S组根据饥饿时间又随机分为六个亚组（n＝15），饥饿1d组（S1亚组）、饥饿2d组（S2亚组）、饥饿3d组（S3亚组）、饥饿5d组（S5亚组）、饥饿7d组（S7亚组）和饥饿9d组（S9亚组）。饥饿期间无饲料供应，自由摄水。饥饿处理后，采用2%多聚甲醛-2.5%戊二醛磷酸盐缓冲液固定心肌组织，行透射电镜观察

6、超微结构；采用4%多聚甲醛磷酸盐缓冲液固定心肌组织，制作石蜡切片，行苏木素-伊红染色观察心肌组织病理学改变。采用免疫组织化学染色与Westernblot法检测大鼠心肌组织LC3与Beclin1的表达水平。结果1HE染色观测结果：C组大鼠心肌组织形态结构正常；与C组比较，S组心肌组织呈不同程度的损伤，随着饥饿时间的延长，病理改变加重。2透射电子显微镜观测结果：C组心肌细胞超微结构正常；S组可见线粒体呈不同程度的损伤，随着饥饿时间的延长，病理改变加重，可见分隔膜与自噬体结构。3免疫组织化学染色结果：与C组比较，S组各亚

7、组大鼠心肌组织LC3与Beclin1表达上调，差异有统计学意义（P＜0.05或P＜0.01）。S组各亚组间两两比较，LC3与Beclin1表达差异均有统计学意义（P＜0.05或P＜0.01），且在S1亚组和S2亚组，LC3与Beclin1表达持续增高，于S2亚组达到峰值后表达逐渐下降，在S7、S9亚组，LC3与Beclin1表达再次升高。4Westernblot检测结果：与C组比较，S组各亚组大鼠心肌组织LC3与Beclin1表达上调，差异有统计学意义（P＜0.05或P＜0.01）。S组各亚组间两两比较，LC3与B

8、eclin1表达差异均有统计学意义（P＜0.05或P＜0.01），且在S1亚组和S2亚组，LC3与Beclin1表达持续增高，于S2亚组达到峰值后表达逐渐下降，在S7、S9亚组，LC3与Beclin1表达再次升高。结论饥饿状态下大鼠心肌组织LC3与Beclin1表达上调，短期饥饿2天LC3与Beclin1表达达到峰值，自噬增强，长期饥饿LC3与Beclin1