自发性高血压大鼠肾αadducin基因表达的增龄性改变和盐摄入的影响

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1、自发性高血压大鼠肾αadducin基因表达的增龄性改变和盐摄入的影响【摘要】目的：观察自发性高血压大鼠（SHR）肾脏αadducin基因表达增龄性改变的一般规律及高盐摄入对其的影响.方法：以雄性SHR为观察对象，按周龄分为幼年组（9inethealterationofαadducingeneexpressioninthekidneyofspontaneouslyhypertensiverats(SHR)loadingonit.METHODS:TheexpressionofαadducinmRNAinthekidneyofdifferentagegroupsofmaleSHR(9

2、,28and53epolymerasechainreaction.RESULTS:αadducinmRNAexpressioninthekidneyaleSHRthanin9RNAexpressionbetRNAlevelinthekidneyofSHRdecreasesabnormallyhighsaltloadingexertsnoinfluenceonαadducinmRNAlevelinthekidneyofSHR.　　【Keyin，使鼠尾动脉扩张，有利于准确测量.然后根据大小将待测大鼠放置于合适的鼠笼中固定，将加压袖口置于大鼠尾根部，鼠尾远端放入光电转换器内以检测脉

3、搏信号.操作过程应避免粗暴抓取，当待测大鼠处于安静状态时开始测量.两组大鼠交替测量.每隔30s重复测量一次，每只每天测量3次，测量3d，取平均值.大鼠处死后迅速取出肾脏，去除肾包膜，肾盂等结缔组织和脂肪组织后，在RNAasefree的生理盐水中迅速漂洗样品，以去除血渍和污物.将肾脏放置冷藏管中，立即置于液氮中速冻，然后在-70℃低温冰箱中低温保存.　　1.2方法　　利用氯仿异丙醇提取RNA，并进行10g/L变性琼脂糖凝胶电泳分析RNA质量，紫外光下可见28S，18S条带清楚，无DNA杂带；并用紫外分光光度计测定其纯度及质量，9，28及53mol/L,dATP,dCTP,dGTP2

4、00μmol/L,dUTP400μmol/L,20.8nkatAmpliTaqGold(r)DNA多聚酶，166.7μkat/LAmpEraseUNG,αadducin和βactin引物各200μmol/L，探针各80μmol/L.配制反应混合物模板量保持一致，配制混合物充分混匀后平均分配至96孔PCR板中.实时PCR反应在ABIprism7700sequencedetectionsystem完成.反应条件：50℃2min,95℃10min；然后进行50个循环.循环条件：95℃30s,65℃30s.设定在每个循环的变性期结束后，程序自动记录上一循环最后10%时间的平均荧光值，以表

5、示在该循环结束时的PCR产物的量.反应完成后，得到含所有标本的记录点曲线，选择PCRbaselineubtracted(PCR基线扣除)模式进行数据分析和修正.在调整Baselinecycles(基线循环)和计算Thresholdvalue(域值)后，计算出Ct值.Ct值含义为每个反应管内的荧光信号到达设定的域值时所经历的循环数，Ct值越小样本中的起始拷贝数越高，通过外标准曲线精确计算样品的起始拷贝数.利用荧光值曲线和Ct值就可以计算αadducin亚单位和βactin的比值，再进行各组的adducinα亚单位基因表达水平的比较.Ct值取中位数.　　统计学处理：计量资料均以x

6、±s表示，应用SPSS10.0统计软件对资料进行统计分析.计算同一样品目的基因（αadducin）和参照基因（βactin）拷贝数的比值，代表αadducinmRNA的表达水平，组间均数比较应用方差分析（onewayANOVA）及LSDt检验，如组间方差不齐，采用非参数willoxon秩和检验.均以P<0.05作为有统计学意义标准.　　2结果　　2．1不同wk龄组SHR的体质量和血压比较随着SHR的年龄增加，血压也逐渐升高，3组的血压有显著性差别（P<0.05）；53wk龄组和28wk龄组较9wk龄组体质量高(P<0.05)，但53wk龄组和28wk龄组之

7、间体质量无明显差别(P>0.05,表1).表19,28和53wk龄SHR体质量和血压的比较(略)　　2.2盐负荷后各RNA的表达水平.28RNA水平的表达无明显影响.而以往的实验也发现在MHS中αadducin基因突变可能通过Na+K+ATP酶活性上调使肾小管钠重吸收增加进一步影响肾脏功能而导致高血压［7-8］，发现老年SHR肾脏αadducin基因表达明显下调.我们仅研究了αadducin基因在mRNA水平的表达，仅代表了转录水平的变化，