四逆汤对肾性高血压大鼠主要靶器官angⅱ 和cgrp表达的影响

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1、四逆汤对肾性高血压大鼠主要靶器官AngⅡ和CGRP表达的影响【关键词】四逆汤高血压肾性心脏肾脑血管紧张素降钙素基因相关肽大鼠［ABSTRACT］ObjectiveToinvestigatetheeffectsofSinitangontheexpressionsofangiotensinⅡ(AngⅡ)andcalciumgenerelatedpeptide(CGRP)inthemaintargetorgansofrenalhypertensionrats.MethodsTaleent(ST)group.Therenalhypertensionmodelsin

2、edimmunohistochemically.ResultsTheexpressionsofCGRPandAngⅡintissuesofkidney,heartandbraininRHgroupentalrats.［KEYin、术后2h仍不苏醒以及状态不好的动物，予以剔除，另选动物补齐。正常对照组不做任何处理。1.3治疗方案四逆汤提取物由北京大学天然药物与仿生药物国家重点实验室提供，实验动物全方给药（附子5g，干姜4.5g，甘草6.0g，合计15.5g），每千克体质量0.04副，合提取物155mg/kg。用蒸馏水将提取物配制成20g/L水溶液。动物造模成功

3、后，四逆汤治疗组动物按7.75mL/kg灌胃，每日1次，连续应用14d，肾性高血压组动物同步给予等量的生理盐水，正常对照组不做处理。1.4标本采集和处理治疗结束后，麻醉动物，仰卧固定，打开腹腔，依次经腹主动脉灌注生理盐水200mL和40g/L多聚甲醛0.1mol/LPBS300mL固定，迅速取心、肾、脑、动脉，置于40g/L多聚甲醛0.1mol/LPBS300mL中后固定2h，蒸馏水浸泡4h，置体积分数0.70乙醇中保存备用。常规脱水、透明、浸蜡、包埋。肾脏沿长轴纵向切片，心脏垂直于长轴沿横切面切片，脑自视交叉后方连续冠状切片，厚度7μm，每隔10张抽取一

4、张，贴于经多聚赖氨酸处理的切片上，室温保存备用。1.5免疫组化检测兔抗大鼠AngⅡ和CGRP单克隆抗体由武汉博士德生物工程有限公司提供，链霉菌抗生物素蛋白过氧化物酶连接法（SP）免疫组化试剂盒由北京中山生物技术有限公司提供。切片常规脱蜡、水化，按试剂盒提供的实验步骤进行操作，DAB显色，光镜下观察，胞浆出现棕色颗粒为阳性着色。部分切片不加一抗，以0.1mol/LPBS代替，不出现阳性着色。高倍镜下（100倍）随机各取4个视野计数阳性细胞（心脏取心肌细胞的横截面），以±s表示。2结果2.1AngⅡ表达心脏内AngⅡ阳性表达见于心肌细胞、血管内皮细胞和平滑

5、肌细胞；脑内阳性细胞见于皮质、脑室脉络膜内皮细胞；肾脏内AngⅡ阳性表达见于肾小球血管内皮、血管内皮细胞管腔侧，少量分布于近曲小管上皮细胞。肾性高血压组心、肾AngⅡ表达水平均显著高于正常对照组，四逆汤治疗组心、肾AngⅡ表达水平均显著低于肾性高血压组（F=14.56～17.28，q=4.12～6.07，P<0.01）。3组脑内AngⅡ表达水平比较差异无显著性。见表1。表1各组靶器官AngⅡ表达水平的比较2.2CGRP表达在心肌细胞横切面上，CGRP阳性颗粒主要位于心肌细胞膜周边，呈现为细密的颗粒；在心肌细胞纵切面上，CGRP阳性颗粒呈线形与心

6、肌纤维走行一致。脑内CGRP阳性细胞分布于皮质、海马神经细胞。肾脏CGRP阳性颗粒，主要分布于肾小管上皮细胞表面和血管平滑肌细胞。AngⅡ是肾素血管紧张素醛固酮（RAS）系统中发挥主要功能的活性物质。RAS系统既是循环内分泌系统，也是全身分布的局部内分泌系统[3]。肾性高血压模型大鼠肾动脉血流减少，肾脏致密斑释放肾素增加，将血管紧张素原转化为血管紧张素Ⅰ，后者在血管紧张素转换酶（ACE）的作用下转变成AngⅡ，从而激活循环中的RAS系统[4]。AngⅡ不仅通过促进肾上腺皮质球状带分泌醛固酮增加，造成体内水钠潴留，而且是强有力的血管收缩剂，能够使全身阻

7、力血管收缩。持续高水平的AngⅡ导致全身小动脉的持续痉挛，痉挛引起的血管组织缺血进一步造成内皮功能的损伤，导致内皮分泌的血管收缩因子和血管舒张因子分泌失衡。同时，AngⅡ还能够诱导血管平滑肌细胞和心肌细胞的增生[5]。有研究指出，参与血管平滑肌细胞和心肌细胞增殖的主要是局部的RAS系统[6]，牵拉可以促进心肌细胞AngⅡ的自分泌增加，高血压心肌肥厚程度与心肌内AngⅡ水平呈显著正相关。另外，肾脏局部的AngⅡ通过调节肾血流量和肾小球滤过率，以及通过促进肾小管对钠离子的重吸收等作用促进高血压的发生发展[7]。CGRP是由分布于全身血管组织的感觉神经释放的

8、血管活性神经肽，是体内最强的舒血管物质