柄海鞘阿片神经肽的免疫组化定位及其作用机制的初步研究

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1、鲁东大学硕士学位论文摘要阿片神经肽的研究已有30多年的历史，它是一种神经活性物质，有激素和神经递质的功能，对中枢神经系统及外周器官均起作用。研究发现，阿片神经肽广泛分布于脊椎和无脊椎动物中，对神经、免疫及内分泌等功能发挥着重要的调节作用。本文采用组织学染色法和透射电镜技术对柄海鞘神经复合体的结构进行观察后，采用免疫组织化学S．ABC法(streptavidin．biotincomplex)，对DYN、13-END和M．ENK三种阿片神经肽在尾索动物柄海鞘(Styelaclava)神经系统、消化系统、生殖系统、水管和外套膜中的分

2、布进行了定位。同时，运用生化测定方法研究了上述三种阿片神经肽对柄海鞘胃肠道内淀粉酶、蛋白酶和脂肪酶活力的影响。免疫组化结果显示，DYN、p-END和M．ENK在柄海鞘体内广泛分布，但分布规律有所不同。神经复合体由神经节、神经腺和疏松结缔组织组成；神经节分为皮质部、髓质部和过渡带；神经腺位于神经节背侧面，由腺小叶组成；神经纤维为有髓神经纤维。在神经节皮质部、髓质部和过渡带中均观察到DYN、p-END和M．ENK免疫阳性神经细胞和神经纤维，其中DYN和M-ENK免疫强阳性神经细胞主要分布于皮质部，神经纤维多呈DYN、13-END和

3、M．ENK阳性或弱阳性。腺小叶中的腺细胞大多呈DYN和M．ENK阳性或弱阳性，呈D．END弱阳性反应。柄海鞘消化系统主要由口、咽和消化道组成，咽的背腹侧各有一沟状结构，为背板和内柱。消化系统的组织结构由内向外依次是粘膜层、粘膜下层和外膜。免疫组化结果显示，在柄海鞘咽壁、背板、内柱和消化道中均有DYN、p-END和M．ENK免疫阳性反应细胞和神经纤维分布，但阳性细胞和神经纤维的数量、分布及强弱程度不同。总体来看，强阳性细胞多分布于粘膜层和外膜；粘膜层游离端和靠近粘膜下层一端有强阳性物质分布；粘膜下层多呈弱阳性反应；粘膜下层和外膜

4、还可观察到阳性反应神经纤维。柄海鞘雌雄同体，精巢和卵巢相间排列。精巢外壁上皮细胞多呈DYN和B．END阳性，少数呈强阳性，极少数呈M-ENK强阳性。精原细胞呈DYN和p-END强阳性，M—ENK阳性。精母细胞2呈DYN和B．END阳性或弱阳性，M．DⅨ弱阳性。DYN、[I-END和M．ENK免疫弱阳性物质主要分布于精细胞细胞质和细胞膜上。精子中三种肽的含量均极低，仅在大量精子聚集时可观察到阳性反应。卵巢壁上皮细胞呈DYN强阳性或阳性，13-END强阳性，部分细胞呈M．ENK强阳性反应。与精巢中的分布规律相同的是，随着生殖细胞的

5、发育，三种肽在其中的含量逐渐减少。柄海鞘有出水管和入水管，组织结构由内向外依次为内上皮层、肌肉层和外上皮层。免疫组化结果显示，三种阿片神经肽在出、入水管的分布规律相同。水管内、外上皮细胞呈B．END强阳性和M。ENK鲁东大学硕士学位论文阳性。DYN强阳性物质主要分布于外上皮细胞细胞膜上，内上皮呈DYN阳性。肌肉层上有DYN、p-END和M．ENK阳性反应神经纤维分布。柄海鞘外套膜由内向外依次为内上皮层、结缔组织层、肌肉层和外上皮层。在内、外上皮层均可观察到DYN、13-END和M-ENK强阳性细胞。结缔组织呈弱阳性。肌肉层有阳

6、性反应神经纤维分布。阿片神经肽在柄海鞘体内的广泛分布，表明其对柄海鞘的神经内分泌、消化、生殖和应激等各种生理功能可能有着重要的作用。阿片神经肽在柄海鞘体内各部分的分布密度不同，可能与其在各部位发挥的功能不同有关。此外，阿片神经肽在柄海鞘神经系统和消化系统中均有分布，进一步证明其为脑肠肽。作为脑肠肽，阿片神经肽可在中枢和外周对柄海鞘胃肠动力、胃肠道的吸收及分泌等功能发挥作用。生化测定结果表明，DYN、13-END和M．ENK对柄海鞘胃肠道中淀粉酶、蛋白酶和脂肪酶活力均有影响。同时，阿片神经肽对消化酶活力的作用依酶的种类不同而不同

7、，且有组织差异性。按5一只的剂量注射DYN，作用后l、3及6l进行酶活力测定。结果表明，DYN在作用时间内对柄海鞘胃、肠蛋白酶及胃淀粉酶活力有抑制作用，且抑制作用随时问的延长而降低；对肠内脂肪酶活力先抑制后促进；促进胃脂肪酶和肠淀粉酶活力。按10一只的剂量注射B．END／M-ENK，作用后1、3、6及10h分别进行酶活力测定，结果如下。作用时间内，B-END对胃、肠淀粉酶活力先抑制后促进，抑制胃蛋白酶、脂肪酶及肠脂肪酶活力，对肠蛋白酶活力有促进作用。M．ENK促进肠内蛋白酶活力，对肠内淀粉酶、脂肪酶及胃内三种消化酶活力均有抑制

8、作用，且随着作用时间的延长，抑制能力下降。阿片神经肽和阿片受体结合后才能发挥作用，因此，阿片神经肽对消化酶活力作用的不同可能与柄海鞘体内各种肽的受体数量和分布不同有关。阿片神经肽可被体内的肽酶降解，随作用时间的延长，体内的阿片神经肽浓度发生变化，对消化酶活力的影响随之改变。关