旋毛虫Ts87重组蛋白黏膜免疫诱导的小鼠保护力的研究

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1、首都医科大学硕士学位论文英文缩略词表英文缩写英文名称中文名称Acracrlyamide丙烯酰胺Ampampicillin氨苄青霉素APSammoniumpersulfate过硫酸胺BSABovineSerumAlbunlin牛血清白蛋白CMISCommonMueosalhlhmurleSystem共同黏膜免疫系统CTBCholeraToxinBSubunit霍乱毒素B亚单位DDWDoubledistilledwater双蒸水DTTdithiothreitol二巯基苏糖醇FBSfetalbovinesel

2、'um胎牛血清GALTgut-associatedlymphoidtissue肠相关淋巴组织HRPhorseradishperoxidase辣根过氧化物酶IgImmunoglublin免疫球蛋白IPTGIsopropyl—D-thiogalactoside异丙基一D一硫代半乳糖苷l①akilodalton千道尔顿LBmediaLufia-bertanimediaLB培养基MA【Tmucosa-assoeiatedlymphoidtissue黏膜相关淋巴组织MinminuteminMISmucosalim

3、munesystem黏膜免疫系统NA【Tnasal—associatedlymphoidtissue鼻腔相关淋巴组织PAGEPolyacrylamidegeleleclrophoresis聚丙烯酰胺凝胶电泳ODOpticaldensity光密度PBSphosphate-buffersaline磷酸缓冲盐溶液首都医科大学硕士学位论文rpmSDS丽STBSTETEMEDRotationperminute每rain转数Sodiumdodecylsulfate十二烷基磺酸钠TrishydroxymethylAm

4、inomethane三(羟甲基)氨基甲烷Tris-buf衔edsalineTris一缓冲盐溶液Tris／EDTAbu仃醯Tris／EDTA缓冲液N，N，N’N’一TetramethylEthylenediamineN，N，N’，N’．四甲基Z,--胺2首都医科大学硕七学位论文旋毛虫Ts87重组蛋白黏膜免疫诱导小鼠保护力的研究中文摘要黏膜免疫系统是由分布于呼吸道、胃肠道、泌尿生殖道和乳腺黏膜内的淋巴组织组成的，占据了机体淋巴组织的大部分。机体95％以上感染发生在黏膜部位，防治黏膜感染在人类健康中占举足轻重

5、的地位，然而传统的疫苗接种，如皮下注射等，不能有效诱导黏膜部位的免疫应答，只有从黏膜部位接种疫苗才能诱导黏膜免疫应答【”。近年来，随着人们对黏膜免疫的重视以及相关理论和技术的不断发展，黏膜疫苗的开发成为了当今免疫学的研究热点，因为黏膜疫苗符合原位免疫设计，即在感染的起始阶段起到预防目的[21。旋毛虫的自然感染途径是经口感染，感染后旋毛虫幼虫囊包在胃液及肠液作用下，幼虫自囊包逸出，并钻入十二指肠及空肠上段的肠黏膜中进行发育和繁殖，产于肠黏膜内的新生幼虫侵入局部淋巴结或小静脉，随淋巴或血循环播散至全身致病。

6、所以研究旋毛虫黏膜疫苗的关键是能在感染的起始部位肠道诱导免疫应答，来阻止病原体的入侵。目前，国内外关于旋毛虫黏膜疫苗的研究主要集中在使用全虫抗原作为免疫原，但这些抗原来源有限，且易引发非特异性反应[3,41。重组抗原易于制备，安全性好，迄今为止，有关重组抗原用于旋毛虫黏膜免疫的研究尚未见报道。本研究利用旋毛虫Ts87重组抗原经黏膜途径免疫小鼠，观察其能否诱导肠道黏膜免疫应答，即能否在感染的起始阶段起到抗旋毛虫的作用，并初步探讨其作用机制，以期制备抗旋毛虫病的黏膜疫苗。选择合适的佐剂和从哪个黏膜部位引入抗

7、原是成功研制黏膜疫苗首先要解决的问题。因此，本研究首先探讨Ts87重组蛋白分别联合不同佐剂(氢氧化铝，AI(OH)3；霍乱毒素B亚单位，CT-B；IMSl312；)经13灌胃免疫小鼠诱导产生的免疫保护作用，观察并比较其保护效果，从中选出一种较好的佐剂。150只NIH小鼠随机分成分5组：CT-B+Ts87蛋白组、AI(OH)3+Ts87蛋白组、IMSl312+Ts87蛋白组、单纯Ts87蛋白组和对照组，灌胃免疫，间隔l周共免疫3次。末次免疫后第7d用400条旋毛虫感染期幼虫攻击，比较各组小鼠肠道成虫数、首

8、都医科大学硕士学位论文雌虫生殖力和肌幼虫数，并收集肠黏液和血清，检测特异性slgA、IgG抗体水平。结果显示：CT-B+Ts87蛋白组成虫减虫率、新生蚴减虫率和肌幼虫减虫率均比其它组高，肠黏液特异性slgA和血清特异性IgG抗体水平也明显高于其它组。这说明CT-B不仅能诱导肠道黏膜免疫反应，而且能诱导全身免疫反应，并能有效促进虫体排出，是辅助Ts87重组抗原发挥作用的良好黏膜佐剂。其次，比较Ts87重组抗原经不同的黏膜免疫途径接种产生的免疫