细粒棘球绦虫重组蛋白p29诱导绵羊的免疫保护力及其免疫机制研究

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1、分类号：R4单位代码：10752密级：公开学号：201200121宁夏医科大学硕士研究生学位论文细粒棘球绦虫重组蛋白P29诱导绵羊的免疫保护力及其免疫机制研究ImmunoprotectionandImmunomechanismofSheepImmunedwithE.granulosusRecombinantproteinP29学位申请人：高富指导教师：赵巍教授申请学位门类级别：医学专业名称：临床检验诊断学研究方向：分子遗传所在学院：检验学院论文完成日期：二〇一五年四月宁夏医科大学研究生院NingxiaMedicalUniversityThesisforApplicatio

2、nofMaster’sDegreeImmunoprotectionandImmunomechanismofSheepImmunedwithE.granulosusRecombinantproteinP29Student’sName:GaoFuSupervisor：ZhaoWeiprofessorSubjectCategory:MedicineMajor:ClinicalexaminationdiagnosticsSpecialty:MoleculargeneticsSchool:InstituteofLaboratoryMedicineCompletionDate:Apr

3、.in2015宁夏医科大学硕士研究生学位论文中文摘要细粒棘球绦虫重组蛋白P29诱导绵羊的免疫保护力及其免疫机制研究摘要目的：通过细粒棘球绦虫重组蛋白P29（rEg.P29）对绵羊免疫保护作用及其免疫机制的研究，为包虫病的免疫预防及疫苗的研制奠定理论基础，并积累有用的资料。方法：利用基因工程重组技术制备的细粒棘球绦虫重组蛋白P29免疫绵羊（免疫2次），并在第二次免疫后用制备好的的细粒棘球绦虫的虫卵感染动物，通过与对照组的比较来观察和计算重组蛋白是否能够诱导动物产生对病原体的免疫保护力（检测并统计动物肝脏包囊荷数，用减囊率公式计算出重组蛋白所引起的免疫保护力）；同时，在重组蛋

4、白免疫和虫卵感染动物前后，分别采集各时间段的动物血液、收集血清，用ELISA法检测动物血清的抗体（IgG、IgA、IgM、IgG1、IgG2）变化水平及细胞因子（IL-2、IL-4、IL-10、IFN-γ）的变化水平，以此来观察重组蛋白免疫及虫卵感染动物前后所引的体液免疫和细胞免疫变化水平。结果：1.rEg.P29免疫绵羊获得了94.8%的免疫保护力。2.rEg.P29在诱导绵羊产生免疫保护力的同时，引起动物体液免疫指标的变化：rEg.P29免疫动物2周后，引起总IgG、IgG1、IgG2水平的增高，与免疫前和对照组的抗体水平相比，差异具有统计学意义（P<0.01）。在虫

5、卵感染后，免疫组IgG、IgG1、IgG2始终保持较高的水平，与对照组相比具有明显的统计学差异（P<0.01）。IgM的水平在免疫组的早期即出现明显的上升期，随后下降，在虫卵感染后也出现了一个明显的上升期。IgA在实验组中免疫前、后相比，有一定的上升，上升的速度不及IgG、IgG1、IgG2，但上升水平与免疫前比较，差异有统计学意义（P<0.01），在虫卵感染I宁夏医科大学硕士研究生学位论文中文摘要后，与对照组相比较，IgA有了明显的上升（P<0.01），并能持续较长时间。rEg.P29免疫及虫卵感染动物后IgG、IgG1、IgG2能长期保持较高的水平，提示重组蛋白能通过

6、诱导动物产生高水平的IgG来抵抗病原体的感染。IgM在重组蛋白免疫的早期及虫卵感染的早期出现一个明显的升高，随后水平下降，说明其具有早期体液免疫效应。IgA在免疫后能够出现增高，但不如IgG水平变化显著，在虫卵感染后，其水平与对照组相比有了明显的上升。3.rEg.P29在诱导绵羊产生免疫保护力的同时，引起动物发生细胞免疫指标的变化：在免疫组中，感染前、后相比较，IFN-γ水平显著升高（P<0.05），IL-2、IL-4、IL-10水平变化不显著。免疫组与对照组相比，感染前、后的IFN-γ、IL-2水平均有显著的升高（P<0.01），IL-4只在感染前较对照组有升高（P<0

7、.01），感染后与对照组相比无明显差异，IL-10感染前、后差异均无统计学意义。而在对照组中，感染前、后相比，IL-4水平上升显著（P<0.05），IFN-γ、IL-2及IL-10在感染前后的变化不明显。由于IL-2、IFN-γ主要是由Th1型细胞所分泌，IL-4、IL-10主要是由Th2型细胞所分泌。rEg.P29免疫动物组（免疫组）与对照相比，免疫组能够明显的引起IFN-γ和IL-2水平的增高，且在虫卵感染后IFN-γ水平进一步增高，提示rEg.P29能介导Th1型细胞为主的细胞免疫应答。对照组在动物感染前后IFN-γ和I