结核杆菌感染致肾损伤与IgA肾病发病相关性研究

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1、·英文缩略语·8中国医科大学研究生学位论文独创性声明本人申明所呈交的学位论文是我本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得我校或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。论文作者签名：D罗J．髟．中国医科大学研究生学位论文版权使用授权书本人完全了解中国医科大学有关保护知识产权的规定，即：研究生在攻读学位期间论文

2、工作的知识产权单位属中国医科大学。本人保证毕业离校后，发表论文或使用论文工作成果时署名单位为中国医科大学，且导师为通讯作者，通讯作者单位亦署名为中国医科大学。学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。学校可以公布学位论文的全部或部分内容(保密内容除外)，以采用影印、缩印或其他手段保存论文。论文作者签名：指导教师签名：·中文论著摘要·结核杆菌感染致肾损伤与IgA肾病发病相关性研究目的leA肾病(IgAnephropathy，IgAN)为一免疫病理学诊断名称，肾活检免疫病理结果为肾小球系膜区以IgA颗粒样沉积为主，

3、临床上以血尿、蛋白尿为主要表现的肾小球肾炎。某些系统性疾病，如过敏性紫癜、肝硬化等也可导致肾小球系膜区IgA为主的免疫球蛋白沉积，但还没有系统研究可以证实结核杆菌感染是否能够导致肾小球系膜区有IgA为主的免疫球蛋白沉积。结核分枝杆菌(Mycobacteriumtuberculosis，MTB)对肾脏的损伤分为临床肾结核、病理肾结核、结核性变态反应综合征和／或结核性自身免疫性疾病肾损伤。但由于尿培养MTB需要4周，结核菌向尿中排放成间歇性，菌阴结核占结核总数的70％，所以MTB相关肾脏损伤早期诊断与防治均尚十分薄弱。本试验目的是进一步明确肾组织上表达

4、结核分枝杆菌A985(MycobacteriumtuberculosisA985，MTB—A985)在结核杆菌感染致早期肾损伤诊断中的意义，并在已证实有结核杆菌感染患者肾活检组织中，检测MTB-A985和IgAl，探讨二者表达的相关性。材料和方法一、实验材料1、实验标本及分组本研究所选各组病例均来自2005年至2007年在中国医科大学附属第一医院住院患者，平均年龄为42．5士19．5岁。(1)阳性对照组：泌尿外科住院的临床肾结核患者外科手术切除肾组织石蜡切片，及其术前24小时尿沉渣，其中6名男患、4名女患，共10例。(2)阴性对照组：肾内科住院的无

5、结核病史及活动结核灶、PPD或血结核抗体检验均为阴性，临床确诊为非IgAN的原发性肾小球肾炎患者肾组织石蜡切片，及其24小时尿沉渣，其中6名男患、6名女患，共12例。(3)实验组：肾内科住院的具有结核病史或活动结核灶、PPD2+或血结核抗体两次阳性、尿培养或尿沉渣查抗酸杆菌阳性肾病患者的肾活检组织石蜡切片，及其24小时尿沉渣，其中20名男患、22名女患，共42例。2、主要试剂和药品抗结核分枝杆菌抗原85(AntiMycobacteriumtuberculosisA985，MTB—A985)、荧光黄标记抗人免疫球蛋白Al(Anti—HumanIgAl

6、—FITC)、免疫组化SABC即用试剂盒、DAB显色试剂盒、生物素化羊抗小鼠培G1。3、主要仪器37"C孵育箱、微波炉、烤片机、光学显微镜、荧光显微镜、显微照相仪、显微图像分析仪、分光光度计。二、实验方法1、尿培养结核分枝杆菌收集各组患者24小时尿液，去上清，留20ml沉渣，离心沉淀后，将沉渣加入4％氢氧化钠溶液消化，无菌操作取上清液，离心后取管底沉渣，加入6％硫酸混匀，将此标本全部接种与固体罗氏培养基斜面，置37"C温箱培养，每周定时观察生长情况，如经过2个月培养后仍无细菌生长为阴性结果。若有细菌生长，如生长慢，培养基呈干燥、颗粒状乳酪色茵落，涂

7、片染色抗酸性强，呈单个散在或索状排列或成簇成团的杆菌，则为有结核杆菌生长。2、肾组织形态学检查肾组织标本用4％多聚甲醛固定，石蜡包埋，HE常规染色，普通光学显微镜观察。3、免疫组织化学结果分析SABC法进行免疫组织化学染色，DAB显色。显微照相仪照相，显微图像分析仪对图像定量分析。每张切片随机选取5个高倍视野(400倍)，测定其阳性染2色物质分光密度(Intergrateopticaldensity,IOD)值。4、免疫荧光结果分析直接荧光免疫法检测各组标本中的IgAl。荧光显微照相仪照相，显微图像分析仪对图像定量分析。每张切片随机选取5个高倍视野

8、(400倍)，测定其阳性染色物质平均灰度值。5、临床资料分析PPD、与血结核抗体检测。6、统计分析方法计量资料f检验分析各