脱铬屑中胶原水解产物的提取及其分子量的测定

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1、郑州工程学院硕士学位论文脱铬屑中胶原水解产物的提取及其分子量的测定姓名：陈秀金申请学位级别：硕士专业：农产品加工与储藏工程指导教师：曹健2003.3.1摘要本文采用CaO和碱性蛋白酶(Alcalase)水解脱铬屑制备胶原水解产物，对影响胶原水解产物收率的各种因素进行了研究。触法的最佳水解条件为：CaO用量4％、(w／w)、反应时间lh、反应温度60。C、水．渣比7、摇瓶转速200rpm／min。在此条件下，收率达55．03％。正交试验中收率最高的酶解条件为：酶用量0．16％(v／w)、反应pH值9．5、反应温度65。C、反

2、应时间40min、水．渣比5、摇瓶转速200rpm／min。在此、、，————。．一条件下，收率达66．2％。i／／采用凝胶过滤色谱法(简称GFC)测定了不同碱水解条件、不同酶解条件、不同，酸水解条件下脱铬屑制备的胶原水解产物的分子量及分子量分布。侯验结果表明：随l着CaO用量的增加、反应温度的升高以及反应时间的延长，胶原水解产物的分子量呈下降趋势。总体来说，不同酶解条件制备的胶原水解产物经SephadexG．100层析后，均分离出高分子量(>150kDal)和低分子量(10kDal左右)两个组分。在酶的最适pH值范围(9

3、．0～9．5)内，低分子量部分所占比例较高。但在本实验条件下，碱性蛋白酶的用量对胶原水解产物分子量的变化影响不大。随着酸法反应时间的延长，胶原水解产物的总体分子量呈下降趋势。采用SDS．聚丙烯酰胺凝胶电泳(简称SDS．PAGE)法对胶原水解产物的分子量进行测定的结果表明，SDS．PAGE法的测定结果与GFC法＼一，一、一基本吻合。k，卢，本文采用甲醛滴定法测定了不同碱水解条件和酶解条件下制备的胶原水解产物的氨基酸态氮含量，结果表明：在不同的碱水解和酶水解条件下，胶原水解产物的氨基酸态氮含量都不高(≤2．1％)。I殳寸碱法、

4、酶法和酸法收率最高的胶原水解产物的理＼化性质和功能特性进行了测定和比较，结果表明：总的来说，酶法样品的质量最好；碱法样品的保湿性最好；胶原水解产物都具有一定的吸水性；酶法样品的起泡性和泡沫稳定性比碱法样品好。与同类产品．A级明胶相比，胶原水解产物的重金属含量符合A级明胶的标准，细菌关键字：脱铬屑j碱处色谱十二烷基硫酸钠AbstractAlkaliandAlcalasewasusedtohydrolysedechromedshavings，andthefactorseffectingcollagenhydrolysateha

5、rvest，suchastheamountofcalciumoxideandAlcalase，aswellastemperature，pHandtimeofhydrolysingreaction，werestudied．Theoptimalalka／ihydrolyzingconditionswePe：CaO4％(w／w)，reactiontimelh，reactiontemperature60"C，ratioofwatertodechromedshavings7：1，rotationalspeed200rpr氆1min．

6、Undersuchconditions，thehighestyieldofcollagenhydrolysatewas55。03％．Theoptimalenzymatichydrolyzingconditionswere：AlcalaseO．16％(v／w)，reactionpH9．5，reactiontemperature65"C，reactiontime40rain，ratioofwatertodechromedshavings5：1，rotationalspeed200rpm／min．Undersuchconditi

7、ons，thehighestyieldofcollagenhydrolysatewas66．2％．Gelfilterchromatography(GFC)wasusedtoanalyzethemolecularweightanditsdistributionofalkali—treated，Alcalase-treatedandacid-treatedcollagenhydrolysatefromdechromedshavings，respectively．Thestudyshowedthatwiththeincreasi

8、ngofcalciumoxideamount，reactiontemperatureandreactiontime，themolecularweightofcollagenhydrolysatetendedtodecrease．AlltheAlcalase*treatedcollagenhydrolys