大花蕙兰组培快繁技术的研究

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1、摘要本实验以大花蕙兰根蔸为外植体，研究以原球茎途径再生植株的方法进行快速繁殖。主要针对外植体的灭菌、原球茎诱导、原球茎增殖、丛生芽增殖、壮茁生根、炼茁移裁等过程中各影响因素进行了研究。研究中主要阅题集中在对不同灭菌方法的选择、不同激素配比和浓度的选择、不同添加物的选择、不同碳源以及不同活性炭用量的选择等多个方面。主要采用正交设计方案来安排试验，并用SAS软件对试验数据进行分析。通过上述试验，对大花蕙兰组培快繁各阶段的主要影响因素和最佳培养基配方作一次系统化研究，以期筛选出最优技术参数组合，建立大花蕙兰最优再生体系，进而

2、提高大花蕙兰商业化生产效率，并为大花蕙兰工厂化育苗提供技术支持。研究结果表明：以大花蕙兰根蔸为外植体，最佳的灭菌流程为：大花蕙兰腋芽一自来水冲洗一洗衣粉上清液浸泡10分钟并用软刷刷去表面污垢一自来水冲洗30分钟一置于超静工作台上一70％酒精20S一无菌水冲洗2次一0．1％HgCl210min一无菌水冲洗2次一0．1％头孢5m抽÷无菌水冲洗2次一2．0％NaCl02min一无菌水冲洗5次一接种。采用这种外植体消毒方法，无菌率为99．08％，成活率达到57．96％。影响大花蕙兰原球茎诱导的主要因素有：细胞分裂索BA和天然添

3、加物，其中以DAB．Omg儿和椰汁15％最优，次要的影响因素是生长素NAA，以0．5埘g／L最好。最适宜的诱导培养基配方是MS+BA4．0mg／L+NAA0．05mg／L+椰汁15％+食糖309／L+琼脂89／L，pH5．4。平均诱导率达到了82．6％。。影响大花蕙兰原球茎增殖的主要影响因素是生长素NAA和细胞分裂素KT，切割方式及丛植密度。其中，生长素NAA和细胞分裂素KT浓度分别为0．2mg／L和2，0mg／L，在对原球茎进行切割处理时采用“井”字形切割法，丛植密度以每瓶接3个或5个原球茎切块为佳；次要因素为细胞分

4、裂素BA，以BA2．0mg／L为最优。促进大花蕙兰原球茎增殖的最优组合为BA2．0mg／L+NAA0．2mg／L+KT2．Omgm，最适宜的培养基配方为MS+BA2．0mg／L+NAA0．2mg／L+KT2．Omg／L+香蕉匀浆1009／L+活性炭1，0g／L+琼脂89／L+食糖309／L+PVP200rag／L。对大花蕙兰原球茎分化的主要影响因素为(1)基本培养基类型(2)细胞分裂素BA(3)生长素NAA，次要因子是细胞分裂素KT。促进大花蕙兰原球茎分化的最优缝合为2MS+BA2，Omg／L+NAAO．Img／L，最

5、适宜的原球茎分化培养基配方为：2MS+BA2．0mg／L+NAA0．1mg／L+KT3．Omg／L+香蕉匀浆1009／L+活性炭1．0g／L+琼脂8班+食糖309／L+PVP200mg／L。丛生芽增殖的最适宜培养基配方为MS+BA2．0mg／L+NAA0．2m∥L+KT2．Omg／L+香蕉匀浆1009／L+活性炭1．0g／L+琼脂89／L+食糖309／L+PVP200mg／L。影响大花蕙兰丛生芽增殖的主要影响因素为(1)细胞分裂素BA，应选用BA2．0mg／L，(2)天然添加物，首选香蕉匀浆汁1009／L，(3)株高，

6、材料选用株高0．5cm左右的小芽，(4)碳源，选用食糖作为碳源。(5)丛植密度，接种前将聚生在一起的小芽团块分切成以三个芽作为一个接种单位，并且在小芽块的基部进行纵向切割处理，并且按照每瓶4株的丛植密度接种可以明显促进丛生芽的增殖。促进大花蕙兰壮苗生根的主要影响因素为细胞分裂素BA，以BA2．0mg／L为最佳，促进苗生长的培养基最优组合为BA2．0mg／L+NAA0．2mg／L，最适宜培养基配方为1／2MS+BA2．0mg／L+NAA0．2mg／L+活性炭1．0g凡+香蕉匀浆1009／L+琼脂89／L+食糖302／L。

7、关键词：大花蕙兰组织培养外植体原球茎增殖nAbstraetThisresearchtakesrootstumpsasexplantandadoptstheregenerationwayofPLBtoestablisharapidtechniquesystemofmieropropagationinCymbidiumGrandiflorium．Thisresearchresolvesaround：exterminatinggermsofexplants，PLBinducement，multiplicationofPLBa

8、ndshootclumps，soundseedlingandrootingandtransplantingfinally,Theexperimentmainlyfocusonthefollowingaspects：theselectionofthebestexplantasepsismethod，basicmediumsandra