氯沙坦对D半乳糖致衰老大鼠肾脏的保护作用

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1、氯沙坦对D-半乳糖致衰老大鼠肾脏的保护作用【摘要】目的探讨血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂氯沙坦对D-半乳糖致衰老大鼠肾脏的保护作用及可能机制。方法将36只大鼠随机分为3组：正常对照组、衰老模型组及氯沙坦治疗组，每组12只。D-半乳糖连续腹腔注射制备亚急性衰老大鼠模型。组织学检查肾组织病理改变，免疫组化方法检测肾组织中结缔组织生长因子(CTGF)、纤溶酶原激活物抑制物-1(PAI-1)的水平。结果组织学检查发现模型组肾小球体积增大，分布稀疏，不同程度的局灶节段性肾小球硬化，肾小管管腔扩大，灶状小管萎缩，间质纤维化;治疗组肾组

2、织改变与模型组相比有所减轻。免疫组化半定量分析结果显示治疗组CTGF、PAI-1的水平较模型组明显减低(P<0.05)。结论氯沙坦可以抑制CTGF、PAI-1的表达，抑制细胞外基质的积聚，减轻肾间质纤维化，从而减轻衰老，发挥肾保护作用。【关键词】氯沙坦;衰老;结缔组织生长因子;纤溶酶原激活物抑制物-1　肾脏是人体最重要的器官,其衰老对机体的影响尤为重要。目前导致肾脏衰老的机制还不完全清楚〔1〕，在众多调控因素中肾素-血管紧张素系统(RAS)起着重要作用。衰老肾脏的病理改变及尿蛋白的增加都可能与肾脏局部血管紧张

3、素升高相关。氯沙坦为血管紧张素Ⅱ(Ang8Ⅱ)Ⅰ型受体拮抗剂，可阻断AngⅡ与其Ⅰ型受体结合，从受体水平拮抗其生物学效应，从而降低肾小球毛细血管内压，改善肾血流动力学异常，缓解早期的高滤过、高灌注状态，减少尿蛋白，保护肾功能。本实验观察了氯沙坦对D-半乳糖致大鼠衰老模型的影响,观察大鼠肾脏的形态变化，并测定大鼠肾组织CTGF和PAI-1的表达，以探讨氯沙坦延缓肾脏衰老的作用机制。　　1材料与方法　　1.1实验对象成年SD大鼠36只，体重250~300g(由辽宁医学院实验动物中心提供)。　　1.2衰老模型建立大鼠每日

4、腹腔注射D-半乳糖(100mg/kg体重)，连续42d，形成糖代谢紊乱所致的亚急性衰老模型。　　1.3实验分组36只大鼠随机分为正常对照组、衰老模型组及氯沙坦治疗组，每组12只。氯沙坦治疗组每天予氯沙坦40mg/kg灌胃。其他两组每天予等量生理盐水灌胃。　　1.4实验试剂兔抗CTGF多克隆抗体、小鼠抗大鼠PAI-1抗体(武汉博士德有限公司);SP工作液试剂盒(北京中山公司);氯沙坦钾(商品名：科素亚，杭州默沙东制药有限公司)。8　　1.5组织学检查肾组织常规组织脱水、透明、浸蜡、包埋。4μm石蜡切片用于HE、Mas

5、son染色，光镜下观察。　　1.6免疫组化检测(ABC法)4μm的石蜡切片脱蜡入水，加3%的过氧化氢，CTGF、PAI-1以微波修复抗原，以蛋白阻断液阻断20min，滴加一抗，4℃过夜，然后加入二抗，室温20min，再加链霉素-生物素-辣根过氧化物酶复合物工作液，室温20min，用DAB显色，显微镜下控制显色时间，最后以苏木素复染、脱水、透明、封片，PBS替代一抗作阴性对照。用计算机图像分析软件进行计算机读片，以对阳性染色区域的积分光密度值做半定量分析。　　1.7统计学方法实验数据以x±s表示，用SPSS11.0统

6、计软件分析，各组间进行组间单因素方差分析。　　2结果8　　2.1大鼠肾组织标本病理改变正常对照组大鼠肾小球分布密集，呈圆形或椭圆形，外周规整，肾小囊的囊腔正常，肾小管的管腔规整;衰老模型组大鼠肾小球体积增大，肾小球分布稀疏，不规整，不同程度的局灶节段性肾小球硬化，肾小囊的囊腔明显扩大，肾小管管腔扩大，上皮细胞变性而且大小不均，灶状小管萎缩，间质纤维化，及少量单核细胞浸润;氯沙坦治疗组大鼠肾小球数量与衰老模型组相比明显增多、肾间质纤维化程度明显减轻，肾小管灶状上皮细胞空泡变性，无萎缩　和代偿性肥大，未见间质水肿，见图

7、1。　　2.2免疫组化指标测定见图2，图3。CTGF在正常对照组肾间质区无或仅有微量表达，在模型组肾间质可见较多的散在的片状分布，以髓质区最为明显，而治疗组较模型组明显减轻(P<0.05)。PAI-1仅在正常对照组大鼠小管上皮细胞胞浆有图1各组大鼠肾脏结构比较(HE，×100)图2各组肾间质CTGF的表达(DAB，×200)图3各组肾间质PAI-1的表达(DAB，×200)少量表达。模型组大鼠主要表达在肾小球壁层上皮细胞、内皮细胞及系膜细胞，小血管的内皮细胞及平滑肌细胞和肾小管上皮细胞。而治疗组大鼠肾小球及小

8、管上皮细胞表达比模型组有所减轻。免疫组化半定量分析结果可见，衰老模型组肾组织CTGF和PAI-1的积分光密度明显高于对照组，而氯沙坦治疗组则明显降低，表明在衰老模型组肾组织CTGF和PAI-1的表达明显增高，而氯沙坦可以降低衰老大鼠肾组织的CTGF和PAI-1的表达水平，见表1。表1肾间质CTGF、PAI-1的表达水平　　3讨论8　　肾脏衰老是机体衰老的重要