脑损伤后肠系膜静脉注射同种异体MBP和自体脑细胞诱导免疫耐受的初步研究

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1、分类号：R651。1密级：学位类别：科学!学位团专业学位口学校代码：1062学号：2010602704学科门类：医学天肄酱科鼻垮TIANJlNMEDICALUNIVERSnⅣ硕士学位论文MASTER’SDISSERTATION论文题目：脑损伤后肠系膜静脉注射同种异体MBP和自体脑细胞诱导免疫耐受的初步研究TITLE：InvestigationonimmunetoleranceinducedbymesentericvenousinfusionofMyelinBasicProteinandhomologoussingle·cellsuspensionofbrain

2、tissueaftersurgicalbraininjury一级学科：临床医学二级学科：外科学论文作者：神经外科马栋斌指导教师：亢建民主任医师导师组成员：闫华博士天津医科大学研究生院二O一三年五月学位论文原创性声明lIIIIIMIIIIIIIIllIllllIlllllllllIllllIIIfY2396392本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下独立进行研究工作取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容和致谢的地方外，论文中不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，与我一同工作的同志学位论文作者签名：◆!月叫日学位论文版权使用授权书本学

3、位论文作者完全了解天津医科大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校向国家有关部门或机构送交论文，并编入有关数据库。保密口，在——年解密后适用本授权书。本论文属于不保密区孑。(请在相对应的方框内打“√”)学位论文作者签名：导师签名：：≯僻j月37日：蝴够乡f日天津医科大学硕士学位论文中文摘要目的：观察颅脑损伤后经肠系膜静脉注射特定抗原免疫耐受建立的情况，初步探讨肝脏非实质细胞诱导免疫耐受的机制。方法：1．选取新西兰兔32只，随机分成4组，每组

4、8只，依次命名为A．D组，A组为单纯颅脑损伤组，B组为注射lml生理盐水组，C组为注射lmlMBP(2mg／m1)组，D组为注射lml脑组织单细胞悬液组(细胞密度为106／m1)。ld四组均开颅造模，取O．8*0．4*0．5cm脑组织制备单细胞悬液；制备好脑组织单细胞悬液后在30min内开腹寻找肠系膜静脉，B组注射lml生理盐水。C、D组分别经肠系膜静脉分别注射lmlMBP和lml单细胞悬液。7d全部处死，取损伤灶周围脑组织做Fas／FasL的定量PCR。2．选取20只SD大鼠，随机分为3组，对照组5只、假手术组5只和损伤组lO只，损伤组按伤后时间分为2、4、

5、8、16h和24h5个采血点，在伤后不同时间点采用眼眶取血法，取静脉血离心后得血清刺激原代培养的大鼠小胶质细胞，培养24h后流式细胞仪测定小胶质细胞MHC．II的表达。3．另选取新西兰兔24只，随机分成3组，每组8只，依次命名为E．G组，E组为注射lml生理盐水组，F组为注射lmlMBP(2mg／m1)组，G组为注射lml单细胞悬液组(细胞密度为106枷)。手术脑损伤造模、注射抗原同第一部分。分别于术后1d、3d、5d、7d、14d和21d抽取静脉血，做Elisa测血清中TGF．p、IL．2和IL．10的含量，21d处死，取肝脏组织做免疫荧光测定Foxp+3表

6、达情况。结果：1．实时定量PCR显示：损伤后7d单纯颅脑损伤组和各处理组Fas均高表达，各组之间未见明显差异(矿0．05)；A、B两组FasL未见表达增高，C组FasL表达显著升高，与A、B两组比较有统计学差异(球O．05)，D组表达略有升高，与A、B两组比较未见统计学差异60>0．05)。2．流式细胞结果显示：空白对照组MHC．II微量表达；假手术组有较低表达；损伤组各个时间点均有表达，且随着时间的推移，MHC．II表达增高。损伤组与对照组两两比较，差异有统计学意义∞

7、d左右到达高峰，随后缓慢下降，差异有统计学意义帜0．05)，IL．2相应减低，差异有统计学意义仞0．05)。天津医科大学硕士学位论文4．免疫荧光化学显示：在注射生理盐水组和注射脑组织单细胞悬液组中，肝脏石蜡切片中T淋巴细胞未看到明显橙红色激发光。在注射MBP组中可看到静脉窦中和血管周围T淋巴细胞中可见橙红色荧光，说明注射MBP可使肝脏T淋巴细胞表达Foxp+3，与其他两组相比，有统计学差异(／9<0．05)。结论：1．

8、各处理组中，Fas在损伤后均高表达，说