枯草芽孢杆菌XM16菌株抗真菌蛋白的分离纯化及性质结构研究

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1、莱阳农学院硕士学位论文枯草芽孢杆菌XM16菌株抗真菌蛋白的分离纯化及性质结构研究姓名：侯顺连申请学位级别：硕士专业：植物病理学指导教师：李宝笃;辛玉成20060601茉日IZ、学院衄!l?协电卫俩盐枯草芽孢杆菌XMl6菌株抗真菌蛋白的分离纯化和性质结构研究摘要本文研冗了枯草芽抱杆菌菌株x⋯6产生抗茼蛋白的发酵条件，从其发酵液中分离纯化出了抗菌蛋白，并对抗菌蛋白的·胜质和结构进行了初步的探讨，对抗茼蛋白的应用打下了艮好的基础．采用不同的温度．不同6々发酵时间、不同6々摇床转速．不同的培养基以及培养基的不同pH值对拈抗菌株XMl6进行培养发15孥，捡驯其友醇

2、彼6，J抗茼j舌性，得到了产生抗菌蛋白的最佳条件：在DH值7的BYl)培乔基中．以30℃的，甚度，摇屎转速为200r／m震荡培养4811’以30％和70％饱和度的硫酸铵进行分级盐析，可得到大量的抗菌蛋白．采用上连的培乔斧件，通过矾酸铵分级沉淀，经i三透析除盐，浓缩蛋白粗提寂经过Sephacryls一100HR凝胶柱层析分离纯化到一种对棉花枯萎病菌具有抑制用的蛋白质，越胶层析的峰I和峰Il部有抑菌活性，说明此拈抗菌株不止分越一种抗菌蛋白，通过sDs—P^GE聚雨烯酰胺裁_Ii之电泳可以看出含有两种蛋白．迪过对抗菌蛋白避行温度．pH．蛋白酶．鼠仿I昀敏感性测

3、定，发现堰抗菌蛋白对热稳定性较好，经过l00℃热处理30n1In，活性采丧失：该抗菌蛋白在不同的酸碱‘许况下比较稳定．但在强碱条件下活性会下降：经氯仿处理后的抗菌蛋白落叙．仍具有明显的抗茼活·

4、生，说明其对氟仿不敏感：在各种蛋白酶处理下，发现川蛋白酶E处理过的蛋白质-；液丧失抑菌活性．但蛋白晦K和胰蛋白酶处理过的仍旦'有部分活性．通过研究发现该抗菌蛋白含有两种蛋白．其分子量分别为21KD和30KD．这两种抗菌蛋白的质谱分析表明：分子量为21KD的蛋白共舍有19种鼠丛酸，其中壳氯酸(L)、天冬氨酸(D】，}J钒酸(G)3神氨基酸的含量最高，而异先氮酸(I)

5、和色氨酸(w)的含量最少，蛋白中不含半胱氨酸(c)，并且盎明该蛋白是一种新的功能蛋白：而分子量为30KD的蛋白也含有19种氯基酸．其中苏氨6￡(T)．天冬酰胺(N)．甘氨酸(GJ的含量最高，而蛋氨酸(H)和组氯酸(⋯的含量最低，蛋白中也不含半恍效酸(C)，并且奄明该蛋白是与一种已知蛋白，且-有_】浞性的功自：蛋白．关键词：抗茼蛋白分离纯化性质结构莱阳农学院顶士学位论文摘要StudiesonPurification，PropertiesandStructureoftheAntifungalProteinSecretedbyStrainXMl6ofBacil

6、lussubtilisAbstractThisthesispresentsastudyonabacter；umnamedXMl6includingtheisolatjon，puri右catjonandcharacterizatIonforanantifungalproteinⅥ，eculturedXMl6st『ainunderdi仃erentconditionsandsIudiedtheantagOnisticactivitiesofthesolidfellllencproduction．Theassayshowedtha¨hestfajncoufdse

7、recte】olsofantjfungaJprofejnunder30℃degreeinBYPmediumofpH7andcultured48hours．ThestudyshowedXMl6strainwithammoniumsulphateat30and70saturatIon{sthemost矗ttjngsaturationforan诅gonjsticproteinprecipjtab讯tywith(NH4)2s04fractionalprecipitatjon，sephacrylS-100HRmo】ecularfictmtionchromatogr

8、印hyfollowedbytracksof疔actionantagonisticaSsay'anantagonfs“cproteinwic11invitr0anta皆onisticactivityto，如一删倒点胪。r“脚wasisolatedandpuri如ed．T11edeterminationofbioactjVityofIhisantagonisticpmteinshowedthaljtsjnhibiIantactiViIydidn’tlossw11entreated啸jCh100℃：for30minutes，anditsjnhibitantac

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