枯草芽孢杆菌论文抗原蛋白枯草芽孢杆菌的筛选论文：降解大豆抗原蛋白枯草芽孢杆菌的筛选及发酵条件

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1、枯草芽孢杆菌论文抗原蛋白枯草芽孢杆菌的筛选论文：降解大豆抗原蛋白枯草芽孢杆菌的筛选及发酵条件摘要：用不同来源的１０株枯草芽孢杆菌菌株ｐ１～ｐ１０发酵生豆粕，筛选到1株对大豆抗原蛋白７ｓ伴球蛋白和１１ｓ球蛋白的降解能力均较强的ｐ３菌株。采用ｐ３菌株发酵生豆粕，对发酵条件进行ｐｈ值、接种量、料水比三因素三水平研究，发现在ｐｈ值为６．５，接种量为４％，料水比为１．０∶０．６，ｐ３菌株可降解９０％以上的抗原蛋白。关键词：枯草芽孢杆菌；发酵；大豆；抗原蛋白；降解ｓｃｒｅｅｎｉｎｇｏｆｂａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓｏｎｄｅｇｒａｄingｓｏｙｂｅａｎａｎｔｉｇｅｎｐ

2、ｒｏｔｅｉｎａｎｄｉｔｓｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｓｈｉｈｕｉａ，ｚｈａｏｓｈｕ－ｍｉａｏｂ，ｌｉａｎｇｙｕｎ－ｘｉａｎｇｂ（ａ．ｃｈｕｔｉａｎｃｏｌｌｅｇｅ；ｂ．ｌｉｆｅｓｃｉｅｎｃｅａｎｄｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ｈｕａｚｈｏｎｇａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，ｗｕｈａｎ４３００７０，ｃｈｉｎａ）ａｂｓｔｒａｃｔ：ｔｅｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｓｏｕｒｃｅｓｏｆｂａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓｓｔｒａｉｎｓｐ１～ｐ１０ｗｅｒｅｕｓｅｄｔｏfermentateｓｏｙｂｅａｎｍｅａｌ，ａｎｄｏｎｅｓｔｒａｉｎｐ３ｗｉｔｈｈｉｇｈｅｆｆ

3、ｉｃｉｅｎｃｙｏｎｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎｏｆｓｏｙｂｅａｎａｎｔｉｇｅｎｐｒｏｔｅｉｎ７ｓｇｌｏｂｕｌｉｎａｎｄ１１ｓｇｌｏｂｕｌｉｎｈａｄｂｅｅｎｓｅｌｅｃｔｅｄ．ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｏｆｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｒｅｓｅａｒｃｈｉｎｄｉｃａｔｅｄｔｈａｔｗｈｅｎｔｈｅｐｈｗａｓ６．５，ｔｈｅｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎｗａｓ４％，ａｎｄｔｈｅｒａｔｉｏｏｆｍａｔｅｒｉａｌｔｏｗａｔｅｒｗａｓ１.0∶０．６，ｔｈｅｐ３ｓｔｒａｉｎｓｃｏｕｌｄｄｅｇｒａｄｅｍｏｒｅｔｈａｎ９０％ｏｆｔｈｅａｎｔｉｇｅｎｐｒｏｔｅｉｎ．ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｂａｃｉ

4、ｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓ；ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ；ｓｏｙｂｅａｎ；ａｎｔｉｇｅｎｐｒｏｔｅｉｎ；ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ大豆粕蛋白质含量高达４０％～５５％，含有人体所必需的８种氨基酸，为全价蛋白源，在动物饲料及人的高蛋白营养保健品中常作为优质原材料［１］。但生大豆中含有多种抗营养因子，且所含的主要蛋白质７ｓ伴球蛋白及１１ｓ球蛋白均为大分子蛋白质，有很强的抗原性，能激起特异的免疫应答，食用后不仅会导致血清中抗大豆免疫球蛋白ｉｇｇ滴度的升高，而且会造成小肠局部发生器质性的损伤［２］。试验通过豆粕发酵试验，筛选出1株对抗原蛋白降解能力较高的枯草芽孢杆菌，最大程度

5、地将大分子的抗原蛋白降解为小分子蛋白，从而提高豆粕的食用安全性和蛋白质的利用消化力。１材料与方法１．１试验材料１．１．１试剂ｔｒｉｓ－ｈｃｌ抽提缓冲液（０．０３ｍｏｌ／ｌ，ｐｈ值８．０）。１．１．２原料新鲜生豆粕（购自东海粮油）。１．１．３菌株及培养基枯草芽孢杆菌ｐ１～ｐ１０，ｐｄａ培养基（含蔗糖）。１．２试验方法１．２．１降解大豆抗原枯草芽孢杆菌的筛选１）试验菌种的准备。将枯草芽孢杆菌ｐ１～ｐ１０菌株分别接入ｐｄａ斜面活化，再分别转接入ｐｄａ液体培养基中，在３７℃摇床中培养１８ｈ作为液体菌种备用。２）豆粕发酵试验。称量豆粕３０ｇ，将ｐ１～ｐ１０菌株以５％

6、和２％的接种量分别接入生豆粕中，加３０ｍl水混合均匀。将以上混合物装入５００ｍl阔口罐头瓶，并用塑料薄膜封好，３７℃恒温箱中静置发酵。３）发酵样品抗原蛋白残留率测定。将未发酵豆粕及ｐ１～ｐ１０菌株发酵的豆粕样品在５０℃烘箱中烘干。每种样品各称取１．００ｇ，加入２０ｍl０．０３ｍｏｌ／ｌ的ｔｒｉｓ－ｈｃｌ抽提缓冲液研磨匀浆［３］，修正各样品ｐｈ值为８．０，浸泡１ｈ后离心（转速８０００ｒ／ｍｉｎ，时间１０ｍｉｎ）去渣，调节上清液ｐｈ值为４．５，离心（转速１００００ｒ／ｍｉｎ，时间１５ｍｉｎ），干燥称重即为各样品中抗原蛋白的质量，抗原蛋白的残留率按下式计算：１．

7、２．２ｐ３菌株的豆粕发酵条件的初步研究１）单因子试验。在温度为３７℃，以接种量、料水比及ｐｈ值３个因素的不同水平发酵大豆粕，测定各发酵样品的抗原蛋白残留率。２）正交试验。在单因子试验的基础上，选取接种量、料水比及ｐｈ值各３个水平，再设计正交试验，优化发酵条件，测定各发酵样品的抗原蛋白残留率。２结果与分析２．１降解大豆抗原蛋白枯草芽孢杆菌的筛选结果表１结果显示，ｐ１，ｐ５，ｐ６，ｐ８，ｐ９菌株发酵的样品中抗原蛋白的残留率高，这些菌株降解抗原蛋白的能力较差。ｐ２，ｐ３，ｐ４，ｐ７，ｐ１０菌株发酵的样品中在５％的接种量下，抗原蛋白的残留率很低，这些菌株降解抗原蛋

8、白的能力较强。其中ｐ３菌株在２％及５％的接种量下，抗原蛋白的残留率