枯草芽孢杆菌粗蛋白的提取纯化及抑菌作用

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1、：１０３６４分类巧；．单化代扔密级：１２７２００５２：学与么化义ｆ学位论文枯草芽跑杆菌粗蛋白的提取纯化及抑菌作用Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎａｎｄｕｒｉｆｉｃａ村ｏｎｏｆｃｒｕｄｅｐｒｏ化ｉｎ化〇１１１皮分献Ｓｐｓｕｂｔｉｌｉｓａｉｎｓｔａｔｈｏｅｎｉｃｆｕｎｇｕｓｇａｐｇ研究生：香朝ｆ指导教师：禮才良甲教ｊ叟申请学位口类级别；农学硕去专业名称：植物病理学研究方向：植物病害嘗理与控制所在学院：植物保扣学院＾；答辩委员

2、会主席＾７二〇—五年六月独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加标注和致谢的地方外文中不包含其他，论人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得安徽农业大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料一。与我同工作的同志对本研巧所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。：研充生签名时间：年ｔ月ｙ曰关于论文使用授权的说明本人完全了解安徽农业大学有关保留、使用学位论文的规定：，即学校有权保留送交论文的复印件和磁

3、盘，允许论文被查阅和借阅，可Ｗ采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意安徽农业大学可Ｗ用不方式在不同同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。保密的学位论文在解密后应遵守此协议（）ｖＴＪｆ獻Ｗ：嘗：日研巧生签名时间＾月／年—ｆ一／第导师签名＝时：化间年曰的／DissertationfortheMasterDegreeExtractionandpurificationofcrudeproteinfromBacillussubtilisagainstpathogenicfungusMas

4、terCandidate:HuangNaMajor:PlantPathologyDirector:Prof.GenjiaTanAnhuiAgriculturalUniversityJune,2015摘要从土壤中分离的生防菌枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis），试验证明它对6种植物病原真菌具有较好的抑制作用。为了进一步研究利用该生防菌，本文研究了不同饱和度硫酸铵提取的枯草芽孢杆菌粗蛋白的抑菌作用和抑菌机理，并通过PAGE电泳技术纯化粗蛋白，并对纯化蛋白进行了初步研究。结果如下：1.枯草芽孢杆菌发酵液、菌悬液和无菌滤液

5、对的6种病原真菌都有抑制作用，并且枯草芽孢杆菌发酵液和无菌滤液对6种病原真菌的抑制率均在60%以上。2.通过测分光光度值得知，枯草芽孢杆菌在42h后达到生长的稳定期，42h以后为为枯草芽孢杆菌生长的衰退期，所以，当枯草芽孢杆菌振荡培养42h时，适合提取粗蛋白。3．枯草芽孢杆菌粗蛋白对6种病原真菌均有抑制作用。不同饱和度硫酸铵提取的粗蛋白对不同病原真菌的抑制效果不同，并且枯草芽孢杆菌胞外粗蛋白比胞内粗蛋白的抑菌效果稳定。枯草芽孢杆菌粗蛋白不仅对苹果炭疽病菌菌丝有明显的破坏作用，使菌丝细胞畸形膨大、扭曲。而且可以抑制苹果炭疽病菌分

6、生孢子萌发和芽管伸长。当硫酸铵饱和度为20-40%时，胞外抗菌蛋白浓度为0.11mg/mL时，对病菌分生孢子的萌发率仅为30.56%，芽管伸长的长度为38.72μm；当硫酸铵饱和度为40-60%时，胞内蛋白浓度为0.11mg/mL时，对病菌分生孢子的萌发率为62.34%，芽管伸长的长度为41.09μm。总体上看，胞外粗提蛋白对病菌分生孢子的萌发和芽管伸长的抑制作用强于胞内蛋白。4.枯草芽孢杆菌胞外粗蛋白的热稳定性比胞内粗蛋白的抑菌效果好，并且随着温度的升高抑菌率逐渐降低，当温度为80℃时，胞外蛋白虽然能有抑菌效果，但是，抑菌率

7、很低仅为10.19%，胞内蛋白的抑菌率仅为7.10%，当温度为100℃时，粗蛋白均没有抑菌活性。粗蛋白的抑菌效果受酸碱度影响不明显。枯草芽孢杆菌粗蛋白经胰蛋白酶、胃蛋白酶、蛋白酶K处理后，抑菌率与对照组的粗蛋白的抑菌率差异显著（P=0.05）。对于胞外粗蛋白，胰蛋白酶、胃蛋白酶、蛋白酶K处理后的的抑菌率分别为对照的74.36%、58.87%、43.96%；对于胞内粗蛋白，胰蛋白酶、胃蛋白酶、蛋白酶K处理后的的抑菌率分别为对照的40.88%、35.67%、45.94%。试验结果说明，该粗蛋白提取液中抗菌物质为混合成分，其中含有一

8、部分蛋白类物质。5.选取硫酸铵饱和度为20-40%的胞外粗提蛋白和硫酸铵饱和度为40-60%的胞内粗提蛋白做室内活体试验，结果表明：先蛋白处理后接种试验中，在不稀释的情况下，胞外蛋白对苹果炭疽病防效可达100%，当稀释10倍以后，防效仍为I61.9%；胞内蛋白防效为41.38