红景天属植物DALP反应体系的建立

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1、中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第3期2005年3月·419·药材与资源红景天属植物DALP反应体系的建立李永谊1，虞泓1’孙，朱荣勋1，和锐1，倪念春1(1．云南英茂生物技术实验室，云南昆明650106；2．云南大学生命科学学院生态遗传学实验室，云南昆明650091)摘要：目的利用直接扩增片段长度多态性(DALP)这一新分子标记技术建立一套稳定的红景天属植物的DALP反应体系。方法以红景天基因组DNA为模板，对DALP反应程序的一些重要参数进行摸索和优化试验。结果建立

2、了一套稳定性强、可靠性高的DALP应用反应体系；经过大量重复性实验，反应体系为20“L，M92+浓度为2．5mmol／L，dNTPs浓度为1．25mmol／L，模板DNA的量为60ng，5pmol／L选择性引物1扯L，5pmol／L反向引物3／*L，引物浓度比为1：3，Taq酶2U。反应过程为：95℃预变性5rain、94℃变性30S、50℃退火30S、72℃延伸1rain；30个循环，再72℃延伸10rain，完成整个PCR反应。结论该体系可有效地应用于红景天属药材的分类鉴定和地道性鉴定。关键词：红景天属；直接扩

3、增片段长度多态性；分子标记；反应体系中图分类号：R282．710．3文献标识码：A文章编号：0253—2670(2005)03—0419—05EstablishmentofDALPreactionsystemforplantsofRhodiolaL．LIYong—yil，YUHon91～，ZHURong—xunl，HERuil，NINian—chunl(1．InmolofLaboratoryBiotechnology，Kunming650106，China；2．LaboratoryofEcologicalGenet

4、ics。CollegeofLifeScience，YunnanUniversity，Kunming650091，China)Abstract：ObjectiveDirectamplificationoflengthpolymorphism(DALP)asanewmolecularmark—erwasusedtoestablishasetofstableDALPreactionsystemfortheplantsofRhodiolaL．MethodsSomesignificantparametersofDALPrea

5、ctionprocedurewereinvestigatedandoptimizedbytakingtheDNAgenomefortheplantsofRhodiolaL．astemplate．ResultsThereactionsystemwas：20“Lreactionsystemcontaining2．5mmol／LM92+，1．25mmol／LdNTPs，60ngDNAtemplate，1址L5pmol／Lselec—tiveprimer，3弘L5pmol／Lreverseprimer，selectivep

6、rimer：reverseprimeris1：3，and2UTaqDNApolymerase．Amplificationprogramis95℃pre—denaturedfor5min，94℃denaturedfor30S，50℃3n—nealedfor30S，72℃extendingfor1min；after30cycles，andthen72℃extendingagainfor10mintotheendofPCRreaction．ConclusionThisDALPreactionsystemisefficie

7、nttoidentifythespeciesandlO—calpopulationsfortheplantsofRhodiolaL．repeatedlywiththestrongerstabilityandreliability．Keywords：RhodiolaL．；directamplificationoflengthpolymorphism(DALP)；molecularmarker；reactionsystem红景天RhodiolaroseaL．为景天科红景天属效成分是红景天苷，它是继人参、刺五加、绞股蓝之

8、多年生草本或亚灌木植物，多生长在海拔3000～后，抗衰老、抗辐射、抗疲劳、抗高温、抗病毒、补益强5000m雪域高原的干旱、低温、缺氧、紫外线照射壮，可供防治神经系统、心血管系统疾病的又一值得强、风大、积雪的石灰岩和砾岩的恶劣环境[1]。红景重视研究的药用植物群体[3]。天属植物在全世界有90多种，分布于欧、亚和北美直接扩增片段长度多态性(directampl